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目的 为了了解表皮肿瘤中细胞信号转导级联成分表达的异常在表皮肿瘤发生中的作用;并通过体外建立的维甲酸对表皮样癌细胞生长影响的模型,观察三代不同的维甲酸对表皮样癌细胞生长的影响,同时对其诱导凋亡作用进行研究,阐明维甲酸抑制表皮样癌细胞增殖或诱导表皮样癌细胞凋亡的作用机制,以及与调节细胞信号转导分子表达的相关性,为临床上选用合适的维甲酸对合适的表皮肿瘤患者进行维甲酸治疗提供科学的依据。 方法 本研究选择30例人皮肤鳞状细胞癌(SCC)、20例皮肤基底细胞癌(BCC)、20例皮肤脂溢性角化(SK)和20例正常人皮肤组织,采用EnVision免疫组化技术观察这些组织中重要信号转导级联成分STAT3和MAPK的活化形式p-STAT3、p-MAPK及其下游基因CyclinDl等蛋白的表达;采用MTT技术观察三代不同的维甲酸包括第一代的全反式维甲酸、第二代的依曲替酸和第三代的芳香维A酸乙酯对表皮样癌细胞A431生长的影响,用光镜和电镜观察细胞形态改变,流式细胞仪检测凋亡峰的出现,Annexin-V染色证实凋亡的发生。并用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白印迹技术检测依曲替酸对表皮样癌细胞STAT3、MAPK及CyclinDl基因表达的影响。 结果 ①p-STAT3在皮肤SCC、BCC中表达的阳性率与正常皮肤和皮肤SK相比明显增高(p<0.01);皮肤SCC中p-STAT3的表达阳性率又明显高于皮肤BCC(p<0.05);而p-MAPK在正常皮肤和表皮的良恶性肿瘤中的表达差异无统计学意义:p-STAT3在皮肤SCC中表达的阳性率与肿瘤的分化程度和肿瘤浸润浙江大学博士学位论文的深度均有关(P< 0.05),但与肿瘤的大小无关。②皮肤SCC中p一51加n,3的表达阳性率与周期素仍刃价万Dl和癌基因p53的表达阳性率呈正相关,p值均<0.05,rs值分别为0.624和0.641。而与肿瘤转移抑制基因介cadherjn的表达阳性率呈负相关性,rs二一0.372,P< 0.05。③同样浓度的第一代全反维A酸和第二代依曲替酸以同样的时间作用于A431细胞,对A431细胞的生长抑制作用不同,依曲替酸对A431细胞的抑制率大于同浓度的全反维A酸,而第三代芳维A酸乙酷对A431细胞的生长无明显的影响;依曲替酸对A431细胞在5 x 10一5、l0’,、5 xlo一“、10芍mol几四个浓度间抑制增殖作用具有剂量效应,p均<0 .01。同时其增殖抑制作用具有时间效应性。依曲替酸对良性角质形成细胞HaCat细胞的生长同样有抑制作用,但抑制率不如对A431细胞。④光镜和电镜观察显示依曲替酸作用4天时,A431细胞核固缩细胞明显增多,并出现典型的凋亡小体。流式细胞仪检测显示随依曲替酸作用时间的延长,亚Gl期凋亡峰明显增加,Annexin一V结合表达染色也证实了凋亡的存在。⑤依曲替酸能明显抑制A431细胞中STAT3和伪四如D丁mRNA水平的表达,随着作用时间的延长,抑制作用增强,p<0.05;并下调p一STAT3、CyclinOI蛋白水平的表达;下调p42/4 4MAPKmRNA的表达。⑥经依曲替酸作用后A431细胞中Q四如D7mRNA表达水平的下降与STAT3 mRNA表达的下降呈正相关,P<0.05;P一S不戊「3、CyelinDI蛋白也同步下调,p<0.05;而Q四加D了mRNA表达的下降与p42/4 4MAPKmRNA的下调无相关性。 结论①51人1,3级联成分的表达异常在表皮肿瘤的发生中起重要作用;51…AT3的过度活化不但在皮肤SCC的发生发展中起重要作用,并与皮肤SCC的侵袭性生长潜能密切相关,可作为皮肤SCC侵袭力判断的辅助指标之一。②p一51’A1,3蛋白在正常皮肤和表皮的良恶性肿瘤中的表达差异有显著统计学意义,而p一MAPK蛋白在正常皮肤和表皮的良恶性肿瘤中的表达差异无统计学意义;③皮肤SCC中,p一51人I,3和癌基因p”表达的阳性率具有正相关性。联合检测p53、s肠钉,3和E一cadherin有助于皮肤SCC患者的预后预测。④在第一代全反式维甲酸、第二代依曲替酸和第三代芳香维A酸乙醋三种维甲酸中,表皮样癌细胞A431细胞对依曲替酸最为敏感,依曲替酸具有抑制A431细胞增殖和