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丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)作为中药材,药用历史悠久。其中属于二萜化合物的丹参酮类物质是丹参中的一类重要次级代谢产物,现代医学研究表明,丹参酮类化合物具有很高的药用价值。目前丹参酮类化合物的获得主要依赖于从种植的丹参中进行提取,通过毛状根培养和微生物生产等方式还不能够大规模生产。对植物中的相关基因进行调节,以提高次级代谢产物的含量,是一种常用的技术方法。在调控丹参酮代谢合成的相关基因中,3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase,HMGR)基因位于甲羟戊酸(Mevalonic acid,MVA)路径的上游,SmGGPPS1、SmKSL1、SmCYP76AH1靠近于丹参酮代谢通路的下游,通过这些合酶基因的调节可以增加丹参酮化合物的含量。因此本文以用于入药的紫花丹参为材料,根据美国国立生物技术信息中心(National Center of Biotechnology Information,NCBI)数据库中已知的的基因序列设计引物,对丹参酮代谢通路上重要合酶基因SmGGPPS1、SmKSL1、SmCYP76AH1进行基因克隆,将得到的基因连接到携带抗除草剂双丙氨酰磷基因(Bioiaphos reistance gene,Bar)的载体pCAMBIA3301中,来自金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的HMGR基因连接到具有潮霉素抗性基因(Hygromycin,Hyg)的pCAMBIA1301载体上,将这些表达基因转入根癌农杆菌GV3101中,借助于农杆菌介导的遗传转化获得再生植株。通过对植株进行检测,得到遗传转化成功的阳性植株,希望能够借助这些基因的探究,为后续试验提供一定的基础。当前已经获得的一些结果如下:(1)通过对丹参组织培养各个阶段激素使用情况的整理,以这些激素配方为参考,对丹参生根培养基和丹参一步成苗培养基进行了探究,获得了能够较好促进丹参芽丛和茎段生根的培养基:MS+0.4 mg/L NAA和丹参一步成苗培养基:MS+1.5 mg/L6-BA+0.5 mg/L NAA+0.1 mg/L IBA,为丹参的遗传转化提供了方便。(2)使用根据已知基因序列设计的引物,提取丹参RNA反转录获得了丹参SmGGPPS1、SmKSL1、SmCYP76AH1基因,并将这三个基因整合到表达载体上进行遗传转化。经过鉴定获得了具有抗除草剂基因Bar和丹参内源基因的阳性植株,其中转基因植株的PCR验证表明,获得了3株转空表达载体pCAMBIA3301-linker2的植株,3株转SmKSL1基因的植株,5株转SmGGPPS1基因的植株,3株转SmCYP76AH1基因的植株。具有潮霉素抗性的转HMGR基因的植株有7株。