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目的:慢性炎症是许多疾病的发生及伴随过程,主要是一种通过巨噬细胞在炎性环境中的调节作用使白细胞不断地涌入损伤组织形成的持续的状态。在慢性炎症环境中巨噬细胞能够被激活并极化形成不同表型,包括促炎型表型M1型及抗炎型表型M2型,参与炎症反应的调节。蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase2A,PP2A)能够调节真核细胞中大部分的磷酸化酶,对于肿瘤发生、胚胎发育及慢性呼吸道疾病等均产生重要影响。但是PP2A与慢性炎症反应之间的关系以及PP2A巨噬细胞表型极化的影响还不完全清楚。因此,本实验旨在探究PP2A对调控慢性炎症反应的影响以及在慢性炎症环境下调控PP2A对巨噬细胞极化表型的调节作用,进而以PP2A作为靶点为减轻慢性炎症反应及临床上治疗磨损颗粒诱导的炎症性骨溶解提供理论依据。
方法:建模:选取40只雄性6周龄C57BL/J6小鼠,随机分为空白对照组、模型组、低剂量及高剂量治疗组,每组10只。将钛颗粒植入颅骨表面,制成磨损颗粒诱导的小鼠颅骨溶解模型。低、高剂量治疗组于每天固定时间于皮下骨膜处注射0.4μg/kg和4μg/kg的溶于DMSO的冈田酸(Okadaic Acid,OA)溶液,模型组和空白对照组予以等量的无菌PBS。14天后处死老鼠收集颅骨标本,行微计算机断层(micro-computed tomography,Micro-CT)扫描及相关组织学染色进行分析并获取结果。选用骨髓米源巨噬细胞(Bone marrow-derive macrophage,BMMs)研究在体外环境中探究抑制PP2A表达对巨噬细胞表型极化的影响。
结果:根据Micro-CT重建观察到的结果,相较于模型组,OA治疗组中的小鼠骨密度(Bone mineral density,BMD)及骨体积与总体积比值(Ratio of bone volume to tissue volume,BV/TV,%)均呈现出不同程度的增多。H&E染色提示治疗组中骨膜厚度及骨表面侵蚀程度明显减少,TRAP染色结果提示治疗组中破骨细胞数量明显减少。免疫组织化学(Immunohistochemical,IHC)染色结果证实治疗组中促炎因子TNF-α,IL-1β和IL-6的数量增加而抗炎因了IL-10的数量减少,同时观察到NF-kB信号通路中IKKα和P65表达量降低。共定位免疫荧光染色显示在治疗组中巨噬细胞中具有促炎效应的M1极化表型减少而具有抗炎效应的M2极化表型增加。此外,细胞免疫荧光染色证实在体外环境下抑制PP2A的表达能够使巨噬细胞促炎的M1表型减少而抗炎的M2表型增加。
结论:本实验的研究结果证明了抑制PP2A的表达能够减轻慢性炎症反应及慢性炎症导致的骨质破坏及骨溶解,阐述了抑制PP2A对NF-kB信号通路的抑制作用,同时也证明了PP2A能够通过抑制NF-kB信号通路来激活调控巨噬细胞由M1极化表型向M2极化表型的转化来减轻炎症反应。提示了PP2A能够参与炎症反应的调节并且能够调控巨噬细胞在慢性炎症环境下发生极化表型的转化,为减轻疾病中慢性炎症反应以及治疗全关节置换术(Total Joint Arthroplasty,TJA)术后发生的磨损颗粒诱导炎症性骨溶解提供了新的研究方向。
方法:建模:选取40只雄性6周龄C57BL/J6小鼠,随机分为空白对照组、模型组、低剂量及高剂量治疗组,每组10只。将钛颗粒植入颅骨表面,制成磨损颗粒诱导的小鼠颅骨溶解模型。低、高剂量治疗组于每天固定时间于皮下骨膜处注射0.4μg/kg和4μg/kg的溶于DMSO的冈田酸(Okadaic Acid,OA)溶液,模型组和空白对照组予以等量的无菌PBS。14天后处死老鼠收集颅骨标本,行微计算机断层(micro-computed tomography,Micro-CT)扫描及相关组织学染色进行分析并获取结果。选用骨髓米源巨噬细胞(Bone marrow-derive macrophage,BMMs)研究在体外环境中探究抑制PP2A表达对巨噬细胞表型极化的影响。
结果:根据Micro-CT重建观察到的结果,相较于模型组,OA治疗组中的小鼠骨密度(Bone mineral density,BMD)及骨体积与总体积比值(Ratio of bone volume to tissue volume,BV/TV,%)均呈现出不同程度的增多。H&E染色提示治疗组中骨膜厚度及骨表面侵蚀程度明显减少,TRAP染色结果提示治疗组中破骨细胞数量明显减少。免疫组织化学(Immunohistochemical,IHC)染色结果证实治疗组中促炎因子TNF-α,IL-1β和IL-6的数量增加而抗炎因了IL-10的数量减少,同时观察到NF-kB信号通路中IKKα和P65表达量降低。共定位免疫荧光染色显示在治疗组中巨噬细胞中具有促炎效应的M1极化表型减少而具有抗炎效应的M2极化表型增加。此外,细胞免疫荧光染色证实在体外环境下抑制PP2A的表达能够使巨噬细胞促炎的M1表型减少而抗炎的M2表型增加。
结论:本实验的研究结果证明了抑制PP2A的表达能够减轻慢性炎症反应及慢性炎症导致的骨质破坏及骨溶解,阐述了抑制PP2A对NF-kB信号通路的抑制作用,同时也证明了PP2A能够通过抑制NF-kB信号通路来激活调控巨噬细胞由M1极化表型向M2极化表型的转化来减轻炎症反应。提示了PP2A能够参与炎症反应的调节并且能够调控巨噬细胞在慢性炎症环境下发生极化表型的转化,为减轻疾病中慢性炎症反应以及治疗全关节置换术(Total Joint Arthroplasty,TJA)术后发生的磨损颗粒诱导炎症性骨溶解提供了新的研究方向。