azurin的克隆表达及其抗肿瘤作用的初步研究

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本研究通过基因重组表达建立了一种高效、稳定的获得azurin的方法,从azurin对肿瘤细胞和内皮细胞的作用两个方面探讨了其抗肿瘤活性,并对azurin可能存在的、与其抗肿瘤活性有关的结构域进行了初步的探索。将azurin基因转化大肠杆菌DH5α,培养细菌扩增目标基因。经限制性内切酶Sal I和Nco I消化后,重组到表达载体pET-DB质粒中,转化大肠杆菌DH5α,得到的阳性转化菌经培养后提取质粒,酶切鉴定和测序结果表明所得到的基因序列是正确的。重组质粒转化表达菌株E.coli BL21(DE3),SDS-PAGE证明目标蛋白得到了高效的可溶性表达。通过镍柱亲和层析和Separdex G-75凝胶过滤的方法纯化了azurin,纯化的蛋白能够抑制人肺癌细胞(A549)、人口腔鳞癌细胞(ACC-3)、人乳腺癌细胞(MCF-7)、人结肠癌细胞(LOVO)和人肝癌细胞(HEP-3)等肿瘤细胞和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的生长,并能诱导肿瘤细胞的凋亡,但对人脐静脉内皮细胞形成血管样网状结构的能力没有明显的抑制作用。同时,通过胰酶降解的方法对azurin可能存在的功能性结构域进行了初步的探索。我们的研究为进一步研究azurin的抗肿瘤作用及其应用奠定了基础。
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