前言孢子丝菌病是常见的深部真菌病,世界各地均有流行。碘化钾是治疗本病的首选药物,但有其局限性,影响了在临床上的应用。温热疗法一般作为替代辅助疗法,是简便易行且有效的局部治疗方法,即可促进皮损消退,更适用于一些不能应用口服药的孢子丝菌病患者,如孕妇,肝肾功能受损者,而且其治疗简单、费用小、无创伤、痛苦小、患者耐受性较好,易于接受。目前认为,温热疗法的机制是直接作用于病原菌,同时影响机体的免疫功能。本研究通过动物实验观察温热疗法的疗效并与口服碘化钾溶液疗法相比较,并通过免疫组化的方法研究温热疗法治疗后皮损内热休克蛋白70的变化,从机体局部细胞免疫功能变化的角度探讨温热疗法的作用机制。材料和方法一、温热疗法与口服碘化钾溶液治疗孢子丝菌病模型小鼠疗效比较(一)材料申克孢子丝菌菌株(CMU12933)来自中国医科大学附属第一医院皮肤科,为局限型皮肤型孢子丝菌病患者的分离株。昆明雌性小鼠,45只,周龄8-10周,体重18-22克,均于尾部近端皮下近1／3及2／3处两点注射孢子丝菌菌悬液约0.05毫升(浓度约1×108个／毫升),建立孢子丝菌病小鼠模型。待出现皮损(约两周)后随机分为对照组、口服碘化钾组和温热治疗组,每组15只。(二)方法温热治疗组接种两周后用恒温水浴箱对小鼠尾部皮损局部水浴治疗,温度42-43℃,20分钟／次,隔日1次,共12次。口服碘化钾组予10%碘化钾溶液口服,给药方式：碘化钾溶液根据小鼠平均每日饮水量(4-6ml／只)配制成0.24%水溶液代替饮用水(相当于人体用量的30ml／天)。对照组接种后不予任何处置。温热治疗开始观察皮损大小变化、炎症反应强度等治疗反应。接种40天后皮损消退记为有效,计算三组有效率,同时小鼠接种处皮损活检真菌培养,真菌培养阴性也记为治疗有效。(三)统计学处理使用SPSS13.0软件进行分析处理,组间比较采用校正的卡方检验,检验效能为0.05.二、皮损内HSP70表达(一)材料动物模型及温热疗法同上。(二)方法及数据统计60只昆明雌性小鼠,实验方法同上。温热治疗开始即观察各组治疗反应如皮损大小变化、炎症反应强度等。第1,3,7,15次热疗8小时后各组取5只小鼠接种处活检做真菌培养,HE及免疫组化HSP70染色。HSP70结果判定方法：于10×40倍光镜下观察组织切片的显色反应,每张切片选3个真皮内炎细胞浸润明显的视野,参照半定量分级评分方法,需两名观察者对切片评分：(1)不着色为0,着色为浅棕黄色为1,深棕色2；(2)阳性着色细胞比例<1%为0,<20%为1,20%-50%为2,>50%为3,以上两项相加为0-1判为-,为2判为+,为3判为++,≥4判为+++。(三)统计学处理采用SPSS13.0统计分析软件处理数据。使用Kruskal-Wallis H检验,检验效能为0.05。实验结果一、温热疗法与口服碘化钾溶液治疗孢子丝菌病模型小鼠疗效比较接种后40天(加热十二次)温热治疗组小鼠尾部皮损活检真菌培养均阴性,口服碘化钾组小鼠治疗结束皮损活检真菌培养结果为13只阴性,2只阳性,对照组接种四十天真菌培养结果为14只阳性,1只阴性；温热治疗组皮损消退的小鼠占86%,口服碘化钾组占93.3%,对照组占13.3%,以上温热治疗组与口服碘化钾组两组真菌培养结果及疗效进行比较,P值均大于0.05,无统计学意义,温热治疗组,口服碘化钾组分别与对照组比较,P值均小于0.05,有统计学意义。二、皮损内HSP70表达HSP70在表皮呈弥漫性表达,基底膜向上有减弱的趋势。真皮毛囊及皮脂腺也有表达,呈弥漫性淡染。以上温热治疗组、对照组及口服碘化钾组与正常皮肤染色结果基本相同。真皮阳性主要表达在炎性细胞的胞浆内,而正常皮肤真皮几乎无表达。热疗后真皮HSP70表达较对照组及口服碘化钾组增多,有统计学差异(p<0.05)。结论1、温热疗法治疗孢子丝菌病模型小鼠有效2、温热疗法与口服碘化钾溶液治疗孢子丝菌病模型小鼠疗效无明显差异。3、温热治疗后孢子丝菌病模型小鼠皮损内HSP70表达增加。