超声靶向微泡破坏对PEX基因转染鼠胶质瘤C6细胞影响的实验研究

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目的(1)采用声诺维(SonoVue)联合超声辐照介导PEX基因转染鼠胶质瘤C6细胞,旨在探讨其可行性以及PEX基因对鼠胶质瘤C6细胞的影响。(2)将超声靶向微泡破坏与脂质体联合来增强PEX基因在鼠胶质瘤C6细胞的转染,旨在探讨超声靶向微泡破坏增强脂质体转染的可行性及优势所在。方法(1)体外生长良好的鼠胶质瘤C6细胞经0.25%胰酶消化计数后,按照2×105/孔的密度接种于6孔板,分为空白对照组、超声+微泡组、质粒组、质粒+微泡组、质粒+超声组、质粒+超声+微泡组。超声辐照参数为频率1MHz、辐照功率1.0W/cm2、持续时间30s、占空比20%。各组分别相应处理后继续培养24h,应用荧光显微镜观察各组细胞增强型绿色荧光蛋白(Enhance green fluorescent protein,EGFP)的表达情况、流式细胞仪检测各组荧光细胞比例以此来评估基因转染率、逆转录PCR检测细胞中PEX mRNA的表达量、流式细胞仪分析细胞周期的分布。(2)体外培养的鼠胶质瘤C6细胞按照实验要求可分为对照组、微泡组、超声组、超声+微泡组、脂质体组、超声+微泡+脂质体组。经过相应的处理,24 h后应用荧光显微镜观察EGFP的表达、流式细胞仪检测基因转染率。结果(1)质粒+超声+微泡组:荧光显微镜下表达绿色荧光的细胞最多,流式细胞仪检测基因转染率最高,逆转录PCR可见特异性PEX电泳条带高表达,流式细胞仪分析细胞周期分布G0/G1期百分数明显升高,与其他各组细胞相比,上述差异均有统计学意义(P均<0.05)。(2)荧光显微镜下,超声+微泡+脂质体组可见大量EGFP表达,明显多于其他各组;流式细胞仪检测转染率,超声+微泡组为(8.59±1.94)%,脂质体组为(13.71±2.99)%,明显高于前者,差异有统计学意义(P<0.05);超声+微泡+脂质体组为(18.31±2.66)%,明显高于其他各组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论(1)声诺维联合超声辐照可增强PEX基因在鼠胶质瘤C6细胞中的转染;体外实验中,PEX基因可通过影响细胞周期来抑制鼠胶质瘤C6细胞的增殖。(2)超声靶向微泡破坏可增强脂质体介导PEX基因在鼠胶质瘤C6细胞中的转染。
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