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目的:类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以损害滑膜、软骨和骨组织症状为主的系统性自身免疫性疾病。肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)在炎症和自身免疫性疾病中发挥着非常重要的作用,重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白(recombinant human tumor necrosis factor-alpha receptor Ⅱ:IgG Fc,rhTNFR:Fc)可以结合并中和TNF-α。rhTNFR:Fc作为一种有效的药物已经在RA的治疗中得到了广泛的应用。本文以人的成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoiocytes,FLS)为研究对象,首次考察rhTNFR:Fc与芍药苷(paeoniflorin,Pae)联合用药对TNF-α刺激的人FLS增殖能力的影响;及对肿瘤坏死因子受体(TNFR)信号通路中的下游蛋白表达的影响,探讨TNFR信号通路在人的FLS上的作用及rhTNFR:Fc和Pae对其的影响。 方法:经患者知情同意,收集行髋关节置换术患者正常滑膜组织,采用组织块培养法对人滑膜细胞进行分离培养。无菌取第3代人的FLS,用TNF-α(20μg/L)体外刺激FLS增殖,分别给予以不同浓度的rhTNFR:Fc(100,10,1,0.1,0.01 mg/L)或Pae(10-5,10-6,10-7,10-8,10-9 mol/L),及各个浓度组合联合给药。细胞培养72h后,MTT法检测人FLS的增殖能力变化,免疫组化法检测人的FLS中肿瘤坏死因子受体1(tumor necrosis factor receptor,TNFR1)、肿瘤坏死因子受体相关因子2(TNF-associated factor-2,TRAF2)、肿瘤坏死因子受体相关死亡结构蛋白(TNF receptor-associated death domain protein,TRADD)的表达情况。 结果: 1. rhTNFR:Fc或Pae以及两者联合用药对FLS增殖的影响。 无菌取第3代人FLS,与正常组相比,在TNF-α(20μg/L)刺激下,FLS增殖功能明显增强,rhTNFR:Fc(10、100 mg/L)或Pae(10-6、10-5 mol/L)均能够抑制TNF-α(20μg/L)刺激下人FLS的异常增殖,而rhTNFR:Fc(10 mg/L)和Pae(10-5 mol/L)联合用药对TNF-α(20μg/L)刺激下人FLS的增殖的抑制优于单独用药。 2.rhTNFR:Fc或Pae以及两者联合用药对FLS TNFR-1、TRAF2和TRADD表达影响。 无菌取第3代人FLS,与正常组相比,在TNF-α(20μg/L)刺激下,FLS上TNFR-1和TRAF-2表达水平明显升高,TRADD表达水平明显下降,分别予以rhTNFR:Fc(10 mg/L)或Pae(10-5 mol/L),则能够明显下调FLS的TNFR-1和TRAF2表达水平,上调TRADD表达水平。与单独给药相比,联合用药能进一步上调TRADD表达,而对TNFR1和TRAF2表达的影响无明显差异。 结论: 1.rhTNFR:Fc和Pae联合用药对人FLS增殖的抑制作用优于单独给药。 2.rhTNFR:Fc和Pae均能显著性下调人FLS上TNFR1和TRAF2的表达,上调TRADD的表达;结果也提示Pae下调人FLS TNFR1和TRAF2表达、上调TRADD表达可能是其抑制FLS增殖的重要机制。 3.rhTNFR:Fc和Pae联合用药对人FLS增殖的抑制作用机制可能与调节TNFR-1、TRAF-2和TRADD有关。