论文部分内容阅读
研究背景:急性中毒是急诊科最常见的疾病之一。据第三次全国死因调查显示“中毒与损伤已成为继恶性肿瘤、脑血管病、呼吸系统疾病和心脏病后的第五大死因,占总病死率10.7%”。百草枯(paraquat,PQ)作为目前世界上使用最广泛的除草剂之一,中毒致死率居我国中毒死亡率之首,已经成为了一个严重的公共社会问题和急诊医学难题。由于缺乏特效解毒剂和有效的治疗方法,目前认为洗胃(gastric lavage,GL)是早期有效清除毒物的最重要手段之一,也是治疗PQ中毒的关键环节。但这种治疗方案的具体细节仍有待进一步商榷。另外,临床上,PQ中毒多以消化道摄取为主,最易损伤的器官为肺脏,目前对于PQ中毒对肺组织造成不可逆损害的机制仍没有完全知晓。本研究从两方面进行研究:(1)PQ中毒猪GL效果观察,(2)PQ暴露致小鼠及A549细胞急性损伤的研究,从而(1)为GL提供了合理的时间点和适当洗脱液体积,以及(2)明确TLR3、NF-κB在PQ中毒致急性肺损伤的作用,进而为PQ中毒提供理论依据和研究方向。第一部分洗胃在百草枯中毒猪的模型中效果观察及评价研究目的:通过快速定量法检测胃液和洗脱液中PQ浓度,来观察和评价PQ中毒猪GL疗效。研究方法:成年健康雌性家猪18只,随机分为PQ染毒组、1 h洗胃组、6 h洗胃组,每组6只。一次性灌胃PQ溶液60 mg/kg构建急性PQ中毒模型;各治疗组于染毒1 h或6 h后用20 L清水GL治疗,收集1 h、6 h和24 h胃液,同时收集第一个10 L和第二个10 L洗脱液;应用快速定量法检测胃液和洗脱液PQ浓度。结果:对胃液和洗脱液两种样品的快速定量法检测条件进行了优化。PQ染毒组猪在H24的生命体征、血常规和血生化与H0相比明显恶化。GL组与PQ染毒组相比,H24的大多数指标有所改善,GL后两组胃液中PQ浓度均显著降低(P<0.05)。两组GL组中,第一个10 L洗脱液中的PQ浓度均显著高于第二个10L洗脱液中的PQ浓度;洗涤效率分别为第一个10 L洗脱液(17.79±4.56%vs.12.42±4.91%)和第二个10 L洗脱液(3.99±2.22%vs.3.35±1.97%)。结论:GL可以减轻PQ对机体毒性反应,即使PQ摄入后6 h进行GL仍可以使急性PQ中毒动物从中获益;第一个10 L洗脱液的洗涤效率明显优于第二个10 L洗脱液;目前使用的20 L的GL可能存在容量过大,建议适当减少。第二部分TLR3/NF-κB信号通路参与百草枯致急性肺损伤的研究研究目的:观察Toll样受体3(toll-like receptor-3,TLR3)、TLR诱导核转录因子(nuclear factor-κappa B,NF-κB)及下游炎性因子肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1 beta,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的改变,从TLR3/NF-κB信号通路探讨PQ致急性肺损伤。研究方法:利用PQ暴露构建小鼠的急性肺损伤模型和拟II型肺泡上皮细胞(A549)的急性损伤模型;观察小鼠肺组织病理改变,进行支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)细胞计数及细胞分类,酶联免疫吸附试验法(enzyme 1inked i Inmullosorbent assays,ELISA)检测炎性因子,阐述PQ对小鼠肺组织的损伤作用;利用CCK8检测细胞存活率,观察PQ致A549细胞损伤;并通过Real-time PCR和Western-blotting观察小鼠肺组织和A549细胞的TLR3、Phospho-NF-κBp65及下游炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6的m RNA和蛋白水平表达变化。结果:与对照组小鼠相比,PQ组存在小鼠呼吸困难,活动能力下降,进食减少,体重下降等症状。与对照组比较,PQ组小鼠的BALF细胞总数明显升高,伴有巨噬细胞,淋巴细胞和中性粒细胞显著升高(P<0.05)。PQ组小鼠肺组织充血水肿明显,病理组织HE染色见炎性细胞浸润和肺间质充血。ELISA结果表明,与对照组相比,PQ组支气管肺泡灌洗液的TNF-α、IL-1β、IL-6表达均明显上升。细胞实验中,CCK8结果示在剂量200-400μmol/L PQ处理24 h后,A549细胞存活率与对照组相比较分别下降了25.3%和36.4%(P<0.05)。Real-time PCR结果提示,PQ组小鼠肺组织和A549细胞TLR3、TNF-α、IL-1β、IL-6在m RNA水平表达均高于对照组(P<0.05)。Western-blotting结果发现PQ组的小鼠肺组织和A549细胞的TLR3、Phospho-NF-κBp65蛋白水平表达明显高于对照组(P<0.05)。结论:PQ可能通过TLR3/NF-κB信号通路上调炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表达而诱导加剧急性肺损伤,该研究可为PQ中毒导致急性肺损伤的干预提供新思路和潜在靶点。