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目的:目前,导致白血病化疗失败的主要原因是其对化疗药物产生了多药耐药性。已有文献报道岩藻糖基转移酶(FUTs)家族与肿瘤发生发展关系密切,但其在白血病多药耐药性中的具体功能及其调控机制还不清楚。本项目以人慢性髓性白血病及其耐药细胞株和临床白血病及其耐药患者外周血有核细胞为研究对象,结合体内和体外抗肿瘤药物敏感试验,研究FUTs家族在白血病多药耐药性中的变化规律及其功能,阐明基于miR-224-3p为探针调控岩藻糖基化在白血病多药耐药性的功能机制,继而为白血病的治疗提供新的靶点。方法:(1)收集人CML细胞株KCL22,KCL22/ADR以及CML患者外周血单个核细胞,采用实时定量PCR对FUTs家族基因水平的表达进行验证,筛选出具有差异表达的岩藻糖基转移酶基因。(2)通过基因转染、RNA干扰等技术调控具有差异表达的FUT4基因,Real-Time PCR法检测基因的表达情况,Western blot法检测蛋白的表达水平。MTT法检测上调、下调FUT4的白血病细胞株对化疗药物的敏感性。进一步建立小鼠皮下移植瘤模型,观察FUT4的表达调控对白血病细胞体内药敏性的影响。(3)首先选择差异表达的miR-224-3p,采用qRT-PCR验证其在KCL22、KCL22/ADR、临床白血病耐药患者外周血单个核细胞的表达情况;分别构建miR-224-3p的mimics, antagomir, agomir寡核苷酸,采用qRT-PCR、Western blot分析其靶分子FUT4的表达水平;荧光素酶报告系统进一步确证miR-224-3p的靶分子FUT4。(4)分别验证靶向miR-224-3p在白血病细胞体外药敏实验、体内药敏实验中的作用。结果:(1)FUTs家族在人慢性髓性白血病及其耐药细胞株、临床白血病及其耐药患者外周血有核细胞的表达具有显著差异。(2)特异性下调KCL22/ADR细胞中FUT4后,该细胞在体内、外的药物敏感性增加(*P<0.05);特异性上调KCL22细胞中FUT4后,该细胞在体内、外的药物敏感性减弱(*P<0.05)。(3) miR-224-3p在人慢性髓性白血病及其耐药细胞株、临床白血病及其耐药患者外周血有核细胞的表达具有显著差异:调控miR-224-3p的表达介导FUT4的表达;FUT4的确为miR-224-3p的靶基因。(4)特异性上调KCL22/ADR细胞中的miR-224-3p后,该细胞在体内、外的药物敏感性显著增加,细胞内FUT4的表达量降低显著;特异性下调KCL22细胞中的miR-224-3p后,该细胞在体内、外的药物敏感性明显降低,细胞内FUT4的表达量明显增加。结论:(1)FUTs家族在人慢性髓性白血病及其耐药细胞株、临床白血病及其耐药患者外周血有核细胞的表达具有显著差异,这些特征性改变与人慢性髓性白血病多药耐药具有相关性。(2) miR-224-3p介导的人慢性髓性白血病多药耐药性的改变很可能是通过靶向调控FUT4基因的表达改变实现的。