热休克蛋白10、27和47在多囊卵巢综合征发生发展中作用的研究

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目的:通过研究热休克蛋白(heat shock protein,HSP)10、27和47在多囊卵巢综合征患者卵巢组织中的表达;以及通过建立小鼠窦卵泡体外培养的模型,进一步研究HSP10对卵泡发育的影响,探讨热休克蛋白10、27和47在多囊卵巢综合征发生发展中的作用,为今后揭示多囊卵巢综合征的发病机制和病理生理、发生发展的调控、预防和治疗多囊卵巢综合征等增加科学的依据。方法:采用荧光实时定量PCR(SYBR GREEN I assay)、Western blot和免疫组织化学技术分别对3例正常妇女(对照组)、3例无排卵PCOS患者(PCOS组)卵巢组织的HSP10、HSP27和HSP47的mRNA及蛋白进行测定。从20日龄小鼠卵巢中分离并挑选出220-250μm的卵泡,置于96孔板中进行3天的体外培养,通过形态学及培养液激素测定来判定培养的结果。采用免疫组织化学技术,比较HSP10在培养前和培养后不同发育阶段的卵泡中的表达。结果:①HSP10 mRNA在PCOS患者卵巢组织的表达与对照组相比,差异无显著性(p>0.05),但个体差异性较大;HSP10蛋白在PCOS患者卵巢组织的表达与对照组相比,表达降低,差异有显著性(p<0.05);免疫组化结果显示HSP10表达于对照组卵巢的所有细胞,而在PCOS组仅在卵泡膜细胞表达水平较高。②HSP27 mRNA和蛋白在PCOS患者卵巢组织的表达与对照组相比,表达降低,差异有显著性(p<0.05);免疫组化结果显示HSP27高表达于对照组卵巢原始卵泡的卵母细胞。③HSP47 mRNA和蛋白在PCOS患者卵巢组织的表达与对照组相比,高表达于PCOS组卵巢,差异有显著性(p<0.05);免疫组化结果显示HSP47高表达于PCOS组卵巢的卵母细胞、颗粒细胞和间质细胞。20日龄小鼠窦卵泡(220-250μm)经过3天的体外培养,体积增大,颗粒细胞增殖,窦腔扩大,分泌的雌二醇增加(p<0.05)。HSP10在窦卵泡中仅表达于卵母细胞,在培养后的卵泡中则表达于卵母细胞,颗粒细胞,卵泡膜细胞。结论:HSP10、HSP27和HSP47在PCOS患者卵巢和正常人卵巢存在差异表达,HSP10在不同发育阶段卵泡中的表达有细胞学的差异。小窦卵泡体外培养的模型为进一步研究PCOS相关蛋白的发病机制提供了良好的基础。研究这些差异表达的蛋白可能与PCOS的多囊卵巢、排卵障碍、高雄激素血症、胰岛素抵抗等症状相关,可能参与PCOS病理发生发展。
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