辣椒花青苷调控基因CaMYB和CaMYC的功能鉴定

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辣椒因具有较高的营养价值而成为我国重要的蔬菜之一。其中紫色辣椒是较为稀少的品种,对紫色辣椒品种的选育已经成为非常重要的育种目标之一。紫色辣椒呈色的原因是因为花青苷的积累。在转录水平上对花青苷的调控是通过MYB、WD40、bHLH形成的复合体MBW来完成的。在紫色辣椒品系Z1的叶片中,结构基因和调控基因共同参与花青苷的合成途径。实验室前期利用VIGS技术沉默转录因子CaMYB,证明CaMYB基因在调控辣椒叶片花青苷的合成起到重要作用,CaMYB直接作用于结构基因,使结构基因下调表达,同时另一个调控基因MYC也呈现出下调表达,然而在辣椒中bHLH类转录因CaMYC是否参与花青苷的生物合成,是否对环境胁迫存在响应并不清楚。CaMYB和CaMYC在调控辣椒叶片中花青苷的关系也并不明确。因此本文探究了CaMYC对低温的响应以及引起的结构基因表达的变化,用VIGS技术对CaMYB和CaMYC基因进行单独沉默,同时沉默后监控花青苷合成途径中相关因的表达情况以及花青苷的含量,来初步分析二者在花青苷生物合成途径中的作用,并通过MYB在辣椒愈伤组织中的过表达来进一步验证它的功能。试验获得的主要结果如下:1.在辣椒叶片生长阶段CaMYC参与调控叶片中花青苷的生物合成紫色辣椒品种Z1第6片叶后叶色主要为绿色,可能是由于Ca MYC对花青苷合成途径中相关结构基因的调控作用,导致辣椒叶片中花青苷含量发生变化。2.低温促进辣椒叶片中花青苷的积累且转录因子CaMYC可以响应低温低温会促进辣椒叶片中花青苷的积累,且在一定时间范围内,花青苷的含量与受到低温胁迫的时间成正比。低温诱导的bHLH类转录因子CaMYC正调控于辣椒叶片中的花青苷积累。在受到低温胁迫6h时,除WD40转录因子外,花青苷合成相关的调控基因MYB、MYC和结构基因PAL、GST、C4H、ANP、F3’5’H、4CL、ANS、CHS、UFGT、F3H、DFR、CHI均呈现出上调表达,这说明MBW调控复合体可以在低温的响应下作用于结构基因的表达,从而引起花青苷含量的上升,这对进一步明确调控复合体MBW在受到环境刺激下对花青苷的调控机制提供了帮助。3.利用VIGS技术对CaMYC和CaMYB进行初步功能验证通过单独沉默CaMYB和CaMYC,同时沉默CaMYB和CaMYC的结果表明,在辣椒叶片中,结构基因GST、ANP、F3’5’H、ANS、CHS、UFGT、F3H、DFR、CHI的表达都会因为CaMYC和(或)CaMYB的沉默而呈现出下调表达。这表明转录因子CaMYB和CaMYC均参与花青苷的生物合成,两者都是通过调控花青苷生物合成途径中结构基因的表达而影响辣椒叶片中花青苷的含量。另外在辣椒叶片中,CaMYC和CaMYB在调控花青苷的生物合成中可能存在着一定的互作关系,共同参与调控花青苷,但还需要后续开展相关蛋白质方面的工作来进一步验证,这对明确转录因子CaMYC和CaMYB在辣椒叶片中调控花青苷的生物合成所发挥的作用提供了作用。4.CaMYB基因在辣椒愈伤组织中的过表达利用转基因技术,CaMYB基因在辣椒愈伤组织中的过表达引起了花青苷生物合成途径中相关基因GST、ANP、F3’5’H、MYC、CHS、UFGT、F3H、DFR、CHI的上调表达,并使愈伤组织中花青苷的含量大幅上升。CaMYB在愈伤组织中的过表达可能引起了MYC的表达,因而共同调控花青苷。这说明CaMYB在MBW调控复合体调控花青苷的生物合成途径中发挥着非常重要的作用。
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