背景： 1．肺缺血再灌注损伤(Ischemia Reperfusion Injury,IR)可在多种临床情况下发生，是肺移植早期和心肺转流术后肺功能障碍的重要原因。文献报道细胞凋亡出现在肝脏、心脏、肾脏、神经系统、视网膜等多种脏器IR损伤过程中，并对IR损伤的发展和该脏器预后具有重大意义。肺缺血再灌注损伤中肺泡细胞凋亡的研究较少。发生凋亡的细胞类型，凋亡发生、发展和消退的动态过程仍未阐明，肺泡细胞凋亡与肺功能损害的相关性尚不明确。 2．沐舒坦，主要活性成分是盐酸氨溴索，能促进肺泡表面活性物质的合成和释放，是一种临床呼吸道粘液溶解剂。进一步研究发现，它能有效清除氧自由基，抑制中性粒细胞呼吸爆发、脱颗粒和胞浆内钙离子浓度的改变，并减少炎性介质的释放，而肺泡表面活性物质减少、中性粒细胞活化、氧自由基和炎性介质生成、释放增加和钙超载等被证实参与了肺缺血再灌注损伤的发生机制，并可能是多种脏器IR损伤过程细胞凋亡的重要原因。所以我们推测沐舒坦能减 浙江大学博士研究生学位论文轻肺缺血再灌注损伤，并可能抑制肺缺血再灌注损伤中肺泡细胞凋亡。此项研究几乎未见文献报道。目的： 研究肺缺血再灌注损伤中肺泡细胞凋亡的动态变化。研究沐舒坦能否减轻肺缺血再灌注损伤和细胞凋亡，并观察沐舒坦能否影响凋亡相关基因比－2在肺组织中的表达。评价凋亡和坏死这两种细胞死亡方式与肺缺血再灌注损伤中肺功能损害的相关性。方法： 1．实验分组： 术前空白对照组（Control组）共 12只，不对动物作任何处理，直接麻醉后剖胸取肺组织及左房血检测，此组作为各组术前空白对照。 假手术组（Sham组）共 54只，术中仅行左侧开胸和左肺门穿带，其余分组同IR组和沐舒坦组。 缺血／再灌注门 组）组，共54只，缺血60min根据再灌注时间不同，再分为 6组，每组 6只，分别为再灌注 omin、30min、lh、Zh、6h和 12h（分别简写为N、凡5、RI、氏、凡、R12人 沐舒坦处理组，共54只，也分6组。自缺血前4h至缺血再灌注6h，200mgidL沐舒坦经尾静脉持续注射，速度为0．3mlth。IR组、Sham组、Colltrol组则持续静脉给予等量NS。余同IR组。 2．采用大鼠单肺原位缺血再灌注模型。 3．TUNEL法测定肺组织中凋亡指数，免疫组织化学染色测定bclZ在肺组织中的表达。 Control组和Sham组、IR组、沐舒坦处理组的u、RZ、R6各有6只动 ．2－ 浙江大学博士研究生学位论文物在实验结束时行台盼蓝活体染色，以评价细胞死亡程度，并结合同组凋亡水平间接推测细胞坏死水平。测定左心房血氧分压、血红蛋白、肺组织湿／干重比。并作光镜和透射电镜观察组织、细胞形态及亚显微结构，进一步确定凋亡发生。 4．统计学处理：实验数据用XtS表示。采用多样本均数间两两比较的分析方法，根据方差齐否选择t或t’检验。相关性研究采用双变量相关分析法，计算 Pearson相关系数。所有统计分析用 SPSS刀统计软件在计算机上完成。结果： 1．肺 IR后，肺组织湿／干重比率在再灌注后 lh开始增加，6h时达到高值，12h又有所下降。 2．肺 IR后，血氧分压在再灌注山后开始下降，到 6h下降到一最低值，12h时己经开始好转。 3．肺IR后，肺组织H＊染色可见肺泡组织水肿，增厚，炎性细胞浸润。到 6h最显著，12h时已经开始好转。 4．肺IR后，肺组织透射电镜观察可见肺泡＊型上皮细胞增多，并且不同程度出现形态学改变，细胞体积缩小变圆，细胞核呈多形性，核被膜外折或内陷，核固缩并边集在核膜下呈月牙状或腰带状，胞浆浓缩，胞浆内嗜饿性板层体减少、排空增多，细胞膜上微绒毛减少或消失，提示细胞凋亡发生。此种亚显微结构的改变在再灌注Zh最为明显。 5．单独缺血肺泡细胞凋亡指数无改变。肺IR后早期，肺泡细胞凋亡指数增高，再灌注 Zh时达到高值，之后有下降，至再灌注 12h已降至 sham组水平。 6．肺IR后，肺泡细胞坏死指数随再灌注时间延长而增高。与细胞凋亡指数相比，坏死指数与肺功能损害的相关性更显著。 7．沐舒坦处理组与IR组比较，肺组织湿／干重比降低，血氧分压增高，肺泡细胞凋亡指数下降，hcf－2在肺组织中的表达增强。肺组织H－E染色中肺泡组织水肿，增厚，炎性细胞浸润有减轻。 －3－ 浙江大学博士研究生学位论文结论： 1．肺缺血再灌注导致肺结构和功能损害，表现为肺组织H－E染色中肺泡组织水肿，增厚，炎性细胞浸润，肺组织湿／干重比增高，血氧分压降低。损害程度随再灌注时间延长而加重，到 6h最显著，12h时已经开始好转。 2．单独缺血不诱发肺泡细胞凋亡。肺g后，肺泡细胞凋亡随再灌注时间延长而加重，Zh时达