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背景JNK是MAPK家族的重要成员。多种胞外刺激因子可激活以JNK为中心的JNK信号转导通路,包括:物理性应激如UV和渗透压休克、炎性因子如IL-1、肿瘤坏死因子(TNF-α)。大量的研究表明,在肝细胞癌中JNK的高水平活化发挥着一定的促瘤作用。RACK1(激活的蛋白激酶C的受体)是由7个Trp-Asp40(WD40)高度保守的序列组成的分子量为36KD的蛋白。RACK1有个多结合位点,可以与不同类型的蛋白相互作用来调节多条信号通路。另外,RACK1七个β螺旋组成的空间结构也为其与不同的蛋白发生作用提供了可能性。有研究表明:RACK1在人肝癌和癌旁组织中的表达与正常肝组织相比表达上调。因此,研究肝癌中JNK通路和RACK1是否存在相关性调节变得格外重要。目的检测肝癌中RACK1与P-JNK之间是否存在相关性;确定MKK7与RACK1之间是否存在相互作用;寻找MKK7与RACK1的相互作用位点;检测RACK1与MKK7之间相互作用对肝癌细胞生长的影响;探讨RACK1高表达的机制。方法通过免疫组化的方法及Western Blot检测肝癌组织芯片和肝癌细胞系中RACK1和P-JNK蛋白的表达;间接免疫荧光的方法检测RACK1与MKK7之间是否存在共定位,外源免疫共沉淀检测RACK1与MKK7之间是否存在相互作用,内源免疫共沉淀检测在生理状态下RACK1与MKK7是否存在相互作用,GST pull-down实验和体外翻译实验检测RACK1与MKK7之间是否存在直接的相互作用;利用分子生物学技术构建了一系列截短突变体,免疫共沉淀检测RACK1和MKK7相互作用的结构域,通过计算机模建设计了两条RACK1的点突变体,免疫共沉淀检测突变位点是RACK1与MKK7相互作用的特异性功能靶位;通过集落形成实验和裸鼠成瘤实验,探讨了MKK7与RACK1相互作用的生物学效应;体外激酶活性分析实验探讨RACK1增强MKK7磷酸化的机制,同时通过Western Blot探讨了肝癌中RACK1高表达的机制。结果肝癌组织芯片中RACK1的表达水平与JNK的活性之间存在着相关性,并且这种相关性在肝癌细胞系中也得到了证实;肝癌等各种不同类型的细胞中外源过表达RACK1,JNK及其下游分子活性增强的同时均伴随有MKK7磷酸化水平的增强,而用小分子RNA干扰Knock down RACK1效应则恰恰相反;RACK1与MKK7之间存在直接的相互作用;RACK1与MKK7的C端相互作用,MKK7与RACK1的WD5-7结构域中的WD6、WD7结构域相互作用;RACK1的269-272、275-280是RACK1与MKK7相互作用的特异性靶位;集落形成实验和裸鼠成瘤实验均显示MKK7与RACK1之间的相互作用能够促进肝癌细胞的生长。结论肝癌中RACK1与P-JNK存在相关性;体内体外实验确定RACK1与MKK7之间存在直接相互作用;鉴定了RACK1与MKK7之间相互作用的结构域及特异性功能表位。MKK7与RACK1之间的相互作用能够促进肝癌细胞的生长;炎性刺激可诱导RACK1表达增强,这一效应依赖于JNK通路的活化。