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目的本文通过检测基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase,MMP-9)及诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)mRNA在无排卵型功能失调性子宫出血(简称无排卵型功血)患者子宫内膜组织中的表达情况,来进一步证实iNOS和MMP-9(又明胶酶B,GelatinaseB)作为子宫内膜局部调控因子在功血中的作用,以及子宫微环境的改变与无排卵型功血发病机制的关系,从而为功能失调性子宫出血(简称功血)的非激素治疗提供一些新的思路和途径。方法一、标本的采集分组:自2005年10月至2006年3月,于中国医科大学附属第一医院妇科门诊因不规则阴道流血就诊并行刮宫的患者中采集无排卵型功血者的子宫内膜60例作为实验组,平均年龄(39.21±3.71)岁,按世界卫生组织(WHO,Scully RE等建议1994年)制定的标准分型,30例为单纯性增生子宫内膜,另30例为复杂性增生子宫内膜;对照组20例,为正常增生期的子宫内膜标本,取自同期在我科行子宫切除术的月经周期正常的子宫肌瘤患者,平均年龄(42.47±2.08)岁。两组研究对象要求3个月内未用过激素类药物,一年内未放置宫内节育环。取材:于刮宫(或子宫离体)后5分钟内迅速取子宫内膜组织,立即置入液氮中冷冻,4小时后再转入-70℃低温冰箱保存备用。二、实验方法应用RT-PCR技术检测iNOS及MMP-9mRNA在子宫内膜中的表达。步骤包括:1、采用RNAout试剂说明书所提供的方法进行总RNA的提取。2、按RT-PCR试剂盒说明配制反应体系后进行反转录反应(RT)及聚合酶链反应(PCR)。3、mRNA表达的半定量分析三、统计学分析结果以均数±标准差表示,并采用SPSS13.0软件进行成组设计两个独立样本t检验。结果1、正常增生期子宫内膜组织中iNOS和MMP-9mRNA均表达。2、无排卵型功血患者的子宫内膜组织中iNOS mRNA表达水平明显高于对照组,两者之间的差异有显著性意义(P<0.01)。3、复杂增生组的子宫内膜iNOS mRNA的表达水平高于单纯增生组,二者之间的差异具有显著性意义(P<0.01)。4、无排卵型功血患者的子宫内膜组织中MMP-9mRNA表达水平明显高于对照组,两者之间的差异有显著性意义(P<0.01)。5、复杂增生组的子宫内膜MMP-9mRNA的表达水平高于单纯增生组,二者之间的差异具有显著性意义(P<0.01)。结论1、无排卵型功血组子宫内膜的iNOSmRNA及MMP-9mRNA的表达水平明显高于对照组,这说明子宫内膜组织中iNOS、MMP-9mRNA表达水平的过度增高可导致子宫的异常出血,二者可能是重要的子宫内膜局部调控因子。2、子宫内膜iNOS和MMP-9mRNA表达水平与无排卵型功血的病理类型有密切关系。