目的：　　牙周病是口腔两大类疾病之一，传统的治疗方法能有效的控制牙周病的发展，但对于缺损牙周组织的修复却不理想，牙周组织再生一直是国内外学者研究的重点。本实验拟探究神经营养素3（neurotrophin-3，NT-3）对人牙囊细胞（human dental follicle cells， hDFCs）成骨分化的影响，为牙周组织再生治疗提供新的参考依据。方法：　　1.组织块结合酶消化法体外分离培养hDFCs，波形丝蛋白染色和角蛋白染色鉴定细胞来源，成骨、成脂诱导鉴定细胞多向分化能力。　　2.CCK-8法检测不同浓度NT-3（0、10、25、50、100 ng·mL-1）对hDFCs增殖活性的影响。　　3.人牙囊细胞ALP染色，根据实验分组（0、10、25、50、100、200 ng·mL-1）细胞培养7天后进行ALP染色。　　4.人牙囊细胞ALP活性检测，根据实验分组（0、10、25、50、100、200ng·ng·mL-1）细胞培养7天后进行ALP活性检测。　　5.检测不同浓度梯度NT-3对hDFCs成骨相关基因的影响。根据实验分组，细胞培养9天后，qRT-PCR检测NT-3对hDFCs成骨基因ALP、BMP-2、OCN mRNA表达量的影响。　　6.矿化结节染色。用含不同浓度 NT-3的培养液培养人牙囊细胞21天后，用0.2%茜素红染液对细胞进行染色，茜素红半定量测定细胞基质钙含量。　　结果：　　1.成功分离培养得到hDFCs，波形丝蛋白染色阳性，角白染色阴性，细胞为间充质来源，经成骨、成脂诱导后，茜素红、油红染色阳性，细胞具备多向分化的潜能。　　2. NT-3对hDFCs增殖活性影响：结果显示NT-3浓度为0 ng·mL-1、10 ng·mL-1、25 ng·mL-1、50 ng·mL-1、100 ng·mL-1对hDFCs增殖活性无明显影响。　　3. ALP活性染色结果：未经成骨诱导的 hDFCs染色较浅，随着NT-3质量浓度的增加，各组细胞的细胞质的蓝紫色染色逐渐加深，但在50、100 ng·mL-1时两组细胞染色差异不明显，200 ng·mL-1胞质染色变浅。　　4. ALP活性检测结果：NT-3能提高hDFCs ALP活性，OIG组ALP活性高于Con组（P＜0.05），当NT-3浓度为25 ng·mL-1、50 ng·mL-1、100 ng·mL-1、200 ng·mL-1时其ALP活性与OIG组相比差异有统计学意义（P＜0.05），并呈现出浓度依赖性。　　5. qRT-PCR检测结果；ALP:当NT-3浓度为25、50、100 ng·mL-1能明显提高ALP mRNA的表达量（P＜0.05）。BMP-2：NT-3浓度为10、25、50、100 ng·mL-1能明显提高。BMP-2 mRNA的表达量（P＜0.05）呈现出浓度依赖性。OCN：NT-3浓度为10、25、50、100 ng·mL-1能明显提高OCN mRNA的表达量（P＜0.05）。　　6.矿化结节染色结果：Con组未见明显红染的矿化结节，OIG组可见少量矿化结节，OIG+ NT-3组矿化结节数量较OIG组增多，其中50、100 ng·mL-1 NT-3+OIG组最明显,细胞钙含量检测结果与染色结果一致。　　结论：　　适宜浓度的NT-3能促进hDFCs成骨分化，为研究NT-3促进牙周组织再生提供一定的参考依据，但对于其具体机制以及通过何种信号通路还需进一步研究。