北部湾八种鱼肠道细菌多样性研究及异源表达技术的初探

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肠道微生物是开发可培养微生物资源,挖掘新型生物合成基因簇和生物活性物质重要的资源库。本研究以纯培养细菌为研究对象,对广西北部湾八种海洋鱼肠道细菌多样性及菌株应用潜力进行了研究。此外,对一株分离自亚洲象粪便的潜在新分类单元进行了详细的细菌系统分类学研究,最后,对细菌次生代谢产物生物合成基因簇的异源表达进行了初步探索。首先,对采自广西北部湾海域8种海洋鱼肠道细菌多样性进行研究。采用5种分离培养基,共分离到228株细菌,其中,放线菌96株,分布于10个目,12个科,21个属;非放线菌132株,分布于3个门,4个纲,6个目,9个科,13个属。R2A作为分离培养基时,具有较好的分离效果。其次,对分离到的228株细菌去重复后,从潜在的新分类单元、抗生素生物合成基因和抗菌活性三个方面对菌株的应用价值潜力进行了评估。以16S r RNA相似性低于98.7%为界定物种的阈值,共分离到13个潜在的新分类单元,分布于9个属。9种功能基因Malacidin、Lugdunin、Teixobactin、Leinamycin、Glutarimide、Salinomycin、Diterpenes、PKS-II和Clavulanic acid筛选到的阳性菌株数分别为1、0、2、12、8、25、10、11和9,分布于24个属。具有抗小麦赤霉菌、马铃薯干腐霉菌、番茄灰霉菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、TB结核分枝杆菌、大肠杆菌、白色念珠菌和黑曲霉的活性的菌株数量分别为9、11、11、3、14、16、14、12、15和14,分布于12个属。再次,对一株来自亚洲象粪便的潜在新分类单元进行了详细的系统分类学研究,通过多相分类确定了菌株YIM 103518具体的分类地位,鉴定为Acinetobacter的一个新种,并将其命名为Acinetobacter faecale sp.nov.。最后,对一株来自亚洲象粪便的链霉菌的6个次生代谢产物生物合成基因簇进行异源表达。通过属间接合转移技术,成功构建了6个基因簇的异源表达突变株,但通过多种发酵培养基发酵,尚未检测到相应代谢产物,还需进行进一步研究探索。本研究结果表明,肠道微生物不仅是可培养微生物新物种的来源,还是挖掘次生代谢产物生物合成基因簇以及开发生物活性物质重要资源库。
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