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目的:结直肠癌在临床上具有较高的发病率和死亡率,多项临床实验结果表明,长期服用塞来昔布能够有效抑制大肠癌的发生及疾病复发,但塞来昔布抑制大肠癌的机制仍未完全阐明。microRNA200家族在多种肿瘤的整个过程都起调节作用,且通过检测miR-200s的表达能够帮助判断疾病的发展及预后,临床实验结果表明miR-200s在大肠癌中下调,提示miR-200s可能参与调控大肠癌的发展。本研究旨在探讨塞来昔布通过调控人结肠癌细胞中microRNA200s来调节肿瘤干性蛋白的表达,并探讨塞来昔布通过影响EMT、自噬、凋亡等相关蛋白的表达来抑制大肠癌的发展。方法:本实验主要包括两个部分。1.第一部分通过大肠癌细胞实验检测塞来昔布调控miR-200s对肿瘤干性蛋白表达的影响。（1）塞来昔布作用人结肠癌细胞HT29和SW480后,CCK8检测癌细胞的增殖能力。（2）塞来昔布作用HT29、SW480细胞48h,通过qRT-PCR技术检测microRNA200（miR-200）家族成员的表达水平。（3）在HT29、SW480细胞中过表达miR-200b,qRT-PCR技术验证转染效率;Western blot检测癌细胞中Oct4、CD133、Lgr5、Sox2、CD44、Nanog等干性蛋白的表达。同时,抑制miR-200b后,通过qRT-PCR技术验证其抑制效果,Western blot检测癌细胞中干性相关蛋白的表达。并在抑制miR-200b后加入塞来昔布,qRT-PCR技术检测miR-200b的表达,Western blot技术检测癌细胞中干性相关蛋白的表达。2.第二部分关于塞来昔布干预或过表达miR-200b对大肠癌细胞EMT、自噬、凋亡、程序性细胞死亡配体1等相关蛋白表达的影响。（1）检测塞来昔布对HT29、SW480细胞EMT相关蛋白的调节;在癌细胞中过表达或抑制miR-200b后,检测转染细胞中EMT相关蛋白的表达。（2）塞来昔布干预HT29、SW480细胞后,流式检测各组癌细胞中活性氧（Reactive oxygen species,ROS）含量。（3）检测塞来昔布对HT29、SW480细胞自噬相关蛋白的调节;在癌细胞中过表达miR-200b后,检测自噬相关蛋白的表达。（4）检测塞来昔布对HT29、SW480细胞凋亡相关蛋白表达的调节;在癌细胞中过表达或抑制miR-200b后,检测凋亡相关蛋白的表达。（5）流式检测塞来昔布对HT29、SW480细胞凋亡的影响（Annexin V-FITC/PI原理）。（6）检测塞来昔布对HT29、SW480细胞程序性细胞死亡配体1（Programmed death-ligand 1,PD-L1）蛋白表达的调节;在癌细胞中过表达miR-200b后,检测PD-L1蛋白的表达。（7）检测36周造模大鼠大肠组织中EMT和凋亡相关蛋白的表达。结果:1.第一部分:（1）CCK8结果显示:随着塞来昔布干预剂量和时间的延长,其明显抑制HT29和SW480细胞的增殖（p<0.05）。（2）q PCR实验结果显示:塞来昔布分别促进HT29和SW480细胞中miR-200s、miR-200b/200c/141的表达（p<0.05）。（3）q PCR结果表明miR-200b的表达增加（p<0.05）,且过表达miR-200b组癌细胞中的Oct4、CD133、Lgr5、Sox2、Nanog、CD44等干性蛋白表达比对照组的表达低（p<0.05）;q PCR实验结果显示:在HT29和SW480细胞中抑制miR-200b后,其表达水平明显下调（p<0.01）,且肿瘤干性相关蛋白较对照组表达上升（p<0.01）;与对照组比较,抑制miR-200b后,接着加入塞来昔布组的miR-200b的表达增加,其癌细胞中肿瘤干性相关蛋白的表达降低,且此组较单加塞来昔布组的干性相关蛋白表达增加（p<0.05）。2.第二部分:（1）与未干预的癌细胞组相比,塞来昔布作用HT29和SW480细胞后,上皮表型标志蛋白E-钙粘的表达增加,间质表型标志蛋白N-钙粘的表达降低（p<0.05）;同对照组相比,过表达miR-200b后,E-钙粘蛋白表达增加,Vimentin和Snail蛋白的表达降低（p<0.05）;同对照组相比,抑制miR-200b后,E-钙粘蛋白表达降低,Vimentin蛋白表达增加（p<0.05）。（2）塞来昔布干预HT29和SW480细胞较对照组明显增加ROS水平（p<0.05）。（3）与对照组比较,塞来昔布干预HT29和SW480细胞后,癌细胞中自噬蛋白LC3Ⅱ和P62蛋白的表达明显增加（p<0.05）;癌细胞中过表达miR-200b后,促进了LC3Ⅱ蛋白的表达,而抑制了P62蛋白的表达（p<0.05）。（4）与未干预组比较,塞来昔布干预HT29、SW480细胞后,促凋亡蛋白Bax和细胞色素C的表达增加,抗凋亡蛋白Bcl2的表达降低（p<0.05）;过表达miR-200b后,增加了促凋亡蛋白Bax和Caspase-9的表达,降低了Bcl2蛋白的表达（p<0.05）;抑制miR-200b后,Bax蛋白的表达低于对照组,抗凋亡蛋白Bcl2蛋白的表达高于对照组（p<0.01）。（5）塞来昔布分别作用HT29、SW480细胞48h后,显著增加癌细胞的凋亡率（p<0.05）。（6）塞来昔布可抑制HT29、SW480细胞PD-L1蛋白的表达（p<0.05）;过表达miR-200b后,也降低了PD-L1蛋白的表达（p<0.05）。（7）塞来昔布干预36周较模型组大鼠组织显著抑制波形蛋白和N-钙粘蛋白的表达,增加E-钙粘蛋白水平（p<0.01）;塞来昔布干预36周较模型组大鼠组织增加Bax的表达,降低Bcl2的表达（p<0.05）。结论:塞来昔布通过调控miR-200b调节大肠癌细胞肿瘤干性指标。同时,塞来昔布干预或过表达miR-200b可调控大肠癌细胞EMT、自噬、凋亡和免疫逃逸等相关蛋白的表达。