论文部分内容阅读
目的:龋病是危害口腔健康的最常见慢性疾病之一。本研究旨在全面了解成人口腔健康和龋病状态下牙菌斑微生物群落多样性及菌群变化,确定是否存在菌斑核心微生物组,鉴定与口腔健康和龋病相关的微生物,从而为龋病的病因学研究和防治提供新的理论依据和方向。方法:严格按照纳入和排除标准,选择160例成人口腔健康和龋病患者为研究对象,根据龋失补牙指数(DMFT)分成4组:高龋(HC)、中龋(MC)、低龋(LC)和无龋(NC)。采集每个受试者的龈上牙菌斑样本,提取细菌基因组DNA,选择性PCR扩增细菌16S rDNA V1-V3区,基于Roche 454 FLX+测序平台,进行454焦磷酸测序,对所得序列进行生物信息学分析。结果:总共获得2261700个高质量序列,聚类成10365个OTUs,代表了453个独立的菌种,隶属于122个属,66个科,34个目,21个纲,12个门。稀释曲线平坦,说明我们的测序深度足够,足以反映菌斑微生物群落多样性。α多样性分析表明健康口腔菌斑微生物多样性要高于龋病患者,而且随着患龋严重程度的增加多样性逐渐降低。Venn图显示四个组共享7522个OTUs,说明存在菌斑核心微生物组。牙菌斑微生物群落的优势菌门包括Bacteroidetes、Actinobacteria、Proteobacteria、Firmicutes、Fusobacteria和TM7,优势菌属包括Capnocytophaga、Prevotella、Actinomyces、Corynebacterium、Neisseria、Streptococcus、Rothia、Leptotrichia和TM7_[G-1]。热图分析和主坐标分析结果提示四个分组的菌斑微生物群落结构相似,组间细菌组成成员较恒定,仅表现为物种丰度的差异。结果鉴定Fusobacteria和GN02与健康相关,Firmicutes、Tenericutes和Synergistetes与龋病相关,此外,鉴定了10个健康相关菌属和21个龋病相关菌属。根据PLS-DA分析,鉴定了27个导致健康和龋病微生物差异分布的潜在关键菌属,其中包括6个龋病相关菌属和7个健康相关菌属,其中Cardiobacterium和Corynebacterium的VIP>2,可能是与健康显著相关的关键菌属。结论:454焦磷酸测序为成人口腔牙菌斑微生物多样性研究提供了丰富的生物学信息。健康口腔菌斑微生物多样性高于龋病患者,而且随着患龋程度的加重,微生物多样性逐渐降低。证实口腔存在菌斑核心微生物组。鉴定了大量与口腔健康和龋病相关的微生物及关键菌属,可为口腔健康和龋病风险评估提供生物标记物。