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目的：观察三肽化合物酪丝亮肽(tyroserleutide，YSL)对人肝癌BEL-7402细胞的细胞周期的影响，并初步探讨其影响细胞周期调控因子阻滞细胞周期运转的可能作用机制。
方法：
1.应用流式细胞术观察YSL对体外人肝癌BEL-7402细胞的G0/G1期和S期细胞周期时相的影响。
2.本研究应用流式细胞术和单细胞凝胶电泳法观察YSL对人肝癌BEL-7402细胞DNA损伤的作用。
3.应用比色法定量检测人肝癌BEL-7402细胞的细胞周期G0/G1期CDK4/cyclinD激酶的活性；应用Western blot和RT-PCR方法从蛋白水平和mRNA水平，观察YSL对体外培养人肝癌BEL-7402细胞的CDK4和cyclin D1蛋白表达的影响。
4.应用比色法定量检测人肝癌BEL-7402细胞的细胞周期G0/G1期CDK2/cyclinE激酶的活性；应用Western blot和RT-PCR方法从蛋白水平和mRNA水平，观察YSL对体外培养人肝癌BEL-7402细胞的CDK2和cyclin E蛋白表达的影响。
5.应用比色法定量检测人肝癌BEL-7402细胞的细胞周期S期CDK2/cyclin A激酶的活性；应用Western blot和RT-PCR方法从蛋白水平和mRNA水平，观察YSL对体外培养人肝癌BEL-7402细胞的CDK2和cyclin A蛋白表达的影响。
结果：
1.血清饥饿法使细胞同步化于G0/G1期，YSL(6.4mg/ml、3.2mg/ml)作用14hrs可使体外培养的BEL-7402细胞G0/G1期细胞百分比增高，S期细胞百分比降低。双胸苷阻断法使细胞同步化于G1/S期，YSL明显增加S期细胞百分比，减少G2/M期细胞百分比。
2.YSL(6.4mg/ml、3.2mg/ml)作用1、2、3、4hrs均能明显增加人肝癌BEL-7402细胞的磷酸化组蛋白H2A.X阳性细胞的百分比，诱导DNA损伤。单细胞凝胶电泳检测显示YSL(6.4mg/ml、3.2mg/ml)作用2、4hrs能够引起人肝癌BEL-7402细胞的DNA损伤。
3.YSL(6.4mg/ml、3.2mg/ml)能够明显抑制BEL-7402细胞G0/G1期CDK4/cyclinD激酶的活性，并随给药剂量的增加抑制作用明显增强。YSL能够显著下调体外培养人肝癌BEL-7402细胞的CDK4、cyclin D1蛋白表达，但对其mRNA水平没有影响。
4.YSL(6.4mg/ml、3.2mg/ml)能够明显抑制BEL-7402细胞G0/G1期CDK2/cyclinE激酶的活性，并随给药剂量的增加抑制作用明显增强。YSL能够显著下调体外培养人肝癌BEL-7402细胞的p-CDK2、CDK2、cyclin E蛋白表达，但对其mRNA水平没有影响。
5.YSL(6.4mg/ml、3.2mg/ml)能够明显抑制BEL-7402细胞S期CDK2/cyclin A激酶的活性，并随给药剂量的增加抑制作用明显增强。YSL能够显著下调体外培养人肝癌BEL-7402细胞的p-CDK2、CDK2、cyclin A蛋白表达，但对其mRNA水平没有影响。
结论：YSL能够将人肝癌BEL-7402细胞阻滞在G0/G1期和S期，该作用可能是由于YSL引起肿瘤细胞DNA损伤，CDK/cyclin激酶复合物感受到了DNA损伤这一信号，使得相应细胞周期的CDK/cyclin激酶复合物活性降低，最终引起细胞周期阻滞，细胞走向凋亡。