脐血造血干细胞移植NOD/SCID小鼠后人免疫功能重建的研究

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目的 探讨脐血来源造血干细胞植入NOD/SCID小鼠所需条件,建立hu-SRC-NOD/SCID模型并检测植入后嵌和体内重建造血和免疫的水平,以期为今后应用该模型发展疫苗、药物等相关研究奠定基础。 方法 分离分选脐血MNC、CD34+细胞,通过尾静脉分别移植各组经照射(60Co,300cGy)或未照射的NOD/SCID小鼠。移植4~10周后流式细胞术分别检测小鼠外周血、骨髓、胸腺人CD45、CD19、CD3抗原的表达;移植6周后提取部分小鼠骨髓、胸腺RNA,RT-PCR扩增人TCR Vβ亚家族基因,并用基因扫描进行T细胞克隆性分析;10周后RT-PCR检测外周血、骨髓人MHC-β2 m及Rag2基因表达:NOD/SCID小鼠PBMNC及胸腺、骨髓、脾细胞反复冻融处理去除免疫反应性和增殖能力后与脐血MNC共培养2~3周经RT-PCR和基因扫描分析脐血T细胞克隆性。 结果 经免疫磁珠分选可获得足量CD34+细胞,纯度80~95%;NOD/SCID小鼠照射后移植脐血CD34+细胞或MNC组较未照射小鼠移植脐血CD34+细胞有更高的植入率,分别为75%、50%、17%;在移植脐血CD34+细胞及MNC照射组的小鼠外周血、骨髓中,经流式细胞术检测到一定水平的人CD45、CD19、CD3抗原表达,前者表达水平更高;移植脐血CD34+细胞的照射组经RT-PCR可在外周血和骨髓中检测到人MHC-β2m基因表达,在骨髓中检测到Rag2基因表达;移植脐血
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