松材线虫病(Pine wilt disease)是由松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)引起的毁灭性的松属植物流行性病害。松材线虫病常年在我国多个省市发生,造成严重损失。近来研究发现松材线虫作为外来入侵物种其入侵性与其繁殖率有密切联系,且种群性比是影响繁殖率的重要因素,但目前对于松材线虫性别决定和分化机制尚不清楚。另一方面,松材线虫dauer幼虫阶段具有较强适应不良环境的能力,且dauer幼虫能借由天牛的取食活动进行扩散,但对于松材线虫dauer幼虫的形成机制尚未明确。深入研究松材线虫性别决定和dauer幼虫形成机制问题有利于发展新的松材线虫病防控策略。本研究本研究参考秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)性别决定基因fem-1和fem-2,以及与dauer幼虫形成基因daf-12,克隆松材线虫中同源基因。克隆获得松材线虫Bxy012009、Bxy005783和Bxy003854片段后,采用实时定量PCR、原位杂交、RNA干扰等技术,探究其时空动态表达特性和调控功能。具体研究结果如下:一、实时定量PCR结果表明,Bxy012009和Bxy003854在松材线虫各发育阶段均有表达,在二龄幼虫的表达量最高,三龄期表达明显下降。二、原位杂交结果表明:Bxy012009基因在松材线虫发育早期可在多个组织细胞如性腺、肠道、皮下细胞等部位表达,到发育后期大多集中于皮下细胞、肌肉等部位,且表达较弱;Bxy005783基因主要在松材线虫性腺中稳定表达;Bxy003854在松材线虫不同发育阶段具有广泛表达,幼虫阶段主要在表皮组织、体壁肌肉、肠道等部位,成虫阶段集中于精子和阴户附近表达。三、RNA干扰结果表明:Bxy012009和Bxy005783基因受双链RNA干扰后线虫种群性比呈下降趋势,且二龄期幼虫处理后性比下降最为显著,说明Bxy012009和Bxy005783基因为松材线虫性别决定关键基因,并且二龄期是性别决定的关键期;Bxy003854基因的沉默使得线虫在高温环境下存活率降低,并且延缓了幼虫的发育进度,表明Bxy003854基因不仅参与调节dauer幼虫形成,还与松材线虫的抗逆性和幼虫发育有关,是保障线虫应对不良环境的关键基因。上述研究结果明确了Bxy012009、Bxy005783和Bxy003854在松材线虫个体的表达特性,以及对性别决定和dauer形成的调控作用,为深入研究松材线虫性别决定和dauer形成的调控机制提供一定理论依据。