目前，肺癌的发病率和死亡率居高不下，严重威胁人类健康。我们实验室利用以往构建的肺癌差异表达基因EST文库提供的信息，克隆了51个肺癌相关新基因。本研究的目的是鉴定新的肺癌相关抑癌基因，为肺癌提供新的早期诊断分子标志物和治疗标靶，并为肺癌分子机理的研究提供新的基础内容。 本研究将候选基因稳定转染NIH/3T3细胞，体外评估这些基因对细胞恶性转化的促进或抑制作用；利用RT-PCR的方法检测目的基因在肺癌组织及其对照组织、肺癌细胞系和永生化支气管上皮细胞系、以及原代培养的正常支气管上皮细胞中的表达情况；通过MTT法、细胞集落形成实验、软琼脂集落形成实验，分析目的基因对肺癌细胞系NCI-H1299增殖能力及非锚定性生长能力的影响：通过裸鼠皮下成瘤实验观察目的基因对肺癌细胞系NCI-H1299致瘤能力的影响；采用流式细胞术检测稳定转染目的基因后对细胞周期和凋亡的影响；通过划痕愈合实验了解目的基因对细胞迁移性的影响；通过寡核苷酸微阵列技术检测目的基因对细胞基因表达谱的影响。 本研究从本实验室前期工作克隆的5个肺癌相关新基因之中，通过表型筛选得到一个能明显抑制NIH/3T3细胞形成转化集落的候选抑癌基因DENND2D。RT-PCR分析发现，在27例肺鳞癌及其配对正常肺组织中，48．1％的肿瘤组织中DENND2D的表达水平下降甚至完全缺失：在9株肺癌细胞系和作为癌前病变模型的2株永生化的支气管上皮细胞系中大部分表达缺失；但是在15例原代培养的正常支气管上皮细胞中，此基因均有一定程度的表达。体外实验显示，DENND2D基因稳定过表达能明显抑制NCI-H1299细胞的增殖速度，降低其平板集落形成数目，并减少软琼脂中集落形成的数目。体内实验证实，DENND2D基因稳定过表达能显著减弱NCI-H1299细胞在裸鼠皮下的成瘤能力，降低裸鼠成瘤率及所形成肿瘤的体积。流式细胞术分析发现，DENND2D基因主要是通过Gl/S期阻滞来发挥其抑制生长的作用，而不是通过对凋亡的诱导。经RT-PCR检测显示，DENND2D基因稳定过表达的细胞中细胞周期调控因子p15、p16、p27、p21等基因均有不同程度的表达下调。划痕愈合实验初步提示DENND2D基因能抑制H1299细胞的迁移能力，使划痕愈合时间延长。基因芯片结果提示DENND2D外源性过表达可对细胞周期，MAPK信号通路、细胞间及细胞与基质间黏附等重要的通路中的某些信号分子的表达产生影响，可在多方面对肿瘤的进展产生作用。综上所述，肺癌相关新基因DENND2D具有抑癌基因的特性，提示它是一个候选的抑癌基因。在癌前病变模型中已见DENND2D基因表达下调，提示它在肺癌的发生发展过程中发挥重要的作用，这将为肺癌的分子机制研究提供新的内容，并将为肺癌的诊断和治疗提供新的线索。