论文部分内容阅读
目的：观察鞘内注射针对PDE4B基因的siRNA对腰5脊神经结扎大鼠的痛觉过敏及炎症因子的影响。方法：90只雄性SD大鼠(180-220g),随机分为5组(n=18)：假手术组、生理盐水组、单纯载体组、错配siRNA组及PDE4B-siRNA组。所有大鼠先行L5-L6鞘内置管,第6天确定导管位置后,假手术组仅暴露腰5脊神经而不结扎,其余4组建立腰5脊神经结扎(spinal nerve ligation, SNL)模型。假手术组分别于术后即刻、术后第1、3、5、7天鞘内注射10μl生理盐水,其它4组分别于腰5SNL术后即刻、术后第1、3、5、7天鞘内注射等量的生理盐水、Lipofectamin RNAiMAX、错配siRNA(?)PDE4B-siRNA (2μg/10μl)。术前1天及术后第2、4、6、8天分别测定5组大鼠的机械缩足阈值(mechanical withdrawal threshold, MWT)和热缩足潜伏期(thermal withdrawal latency, TWL);术后8d行为学测试结束后处死大鼠,取腰段脊髓,采用实时荧光定量PCR(Real-time quantitative Polymerase Chain Reaction, qRT-PCR)测定PDE4B的mRNA表达水平,Western bolt分析PDE4B、细胞外调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)、磷酸化ERK(p-ERK)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein, GFAP)、 CDllb的蛋白表达水平,酶联接免疫吸附剂测定(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay, ELISA)法检测肿瘤坏死因子a (tumor necrosis factor a, TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1β, IL-1β)和白细胞介素6(interleukin-6, IL-6)浓度。结果：术前1天,5组大鼠MWT和TWL值差异无统计学意义。与假手术组相比,腰5SNL后各组大鼠MWT和TWL值下降(P<0.05),腰段脊髓PDE4B的mRNA和蛋白表达量增加,p-ERK、GFAP、CDllb、TNF-α、IL-lβ及IL-6水平升高(P<0.05)；与生理盐水组相比,仅鞘内注射PDE4B特异性siRNA组MWT和TWL值升高(P<0.05),腰段脊髓PDE4B的mRNA和蛋白表达量降低,p-ERK、TNF-α、IL-1β及IL-6水平降低(P<0.05)。腰5SNL术后第8天五组大鼠腰段脊髓内总ERK表达水平无明显统计学差异(P>0.05)。结论：鞘内注射PDE4B特异性siRNA可显著抑制L5SNL大鼠腰段脊髓PDE4BmRNA和蛋白表达,缓解痛觉过敏,这可能与其通过抑制脊髓内胶质细胞活化,减少ERK的磷酸化及炎症因子的表达有关。