共生菌是与生物体共同生存的一大类群的微生物,随着对共生菌的研究日渐增多,众多的共生菌次级代谢产物已经得到了分离、纯化和鉴定,这成为发现新型天然产物的一个重要来源和途径。由于共生菌与宿主长期共同进化,导致它们有着特殊的代谢途径,因此这些共生菌可能产生具有特殊结构及显著生物活性的次级代谢产物。已有的研究证实了共生菌确实能够产生具有新颖骨架的次级代谢产物,而且具有抗菌、抗疟、抗肿瘤、免疫抑制、除草等多种生理功能。在前期工作中,完成了蜚蠊、白蚁、蝴蝶、蜜蜂、蟋蟀五种昆虫的共生菌分离纯化工作,得到真菌20株、放线菌13株以及细菌9株,共42株。通过体外活性实验,从中筛选出了两株活性较强的菌株。在此基础上,我们以其中一株从蜚蠊样品中分得的共生真菌FL-F5(曲霉属,Aspergillus sp.)为研究对象,对其发酵液中的次级代谢产物进行提取、分离、纯化和结构鉴定,并研究了部分分离得到的单体化合物的功能和生物活性。主要研究内容如下:1.综合运用各种现代化的色谱分离手段,对其发酵粗提物进行分离纯化,分离得到9个单体化合物,利用多种鉴定技术综合解析代谢产物的结构,确定了5个化合物的平面结构,其中1个为新骨架化合物Aspergirin A(1),4个为已知化合物:反式-对羟基肉桂酸甲酯(2),6,8-二羟基-3,4,5-三甲基异香豆素(3),反式-对羟基肉桂酸(4),苜蓿素(5)。2.运用荧光光谱法对四个已知化合物(2-5)与不同金属离子的相互作用进行研究,结果发现化合物3和5加入铅离子后荧光强度分别增大8.5和5.3倍,表明化合物3和5对铅离子有识别作用。通过Job’s plot分析法和Benesi-Hildebrand方程,可以确定这两个化合物与Pb2+的结合比为1:1,其结合常数分别为1.62×104和1.84×104。3.考察了四个已知化合物(2-5)对5-脂氧合酶(LOX)活性的抑制作用,结果显示化合物2、3和4对5-LOX酶基本无抑制作用,化合物5对5-LOX有抑制作用,IC50值为2.05 mmol/L。考察了四个已知化合物(2-5)对酪氨酸酶活性的抑制作用,结果表明化合物2对酪氨酸酶的活性基本无抑制,化合物3、4和5对酪氨酸酶酶的活性有抑制,IC50值分别为0.94 mmol/L、0.41 mmol/L和0.66 mmol/L,阳性对照Vc的IC50值为0.31 mmol/L,这三个化合物对酪氨酸酶活性的抑制作用跟阳性对照Vc相当,动力学实验发现化合物3对酪氨酸酶的抑制属于可逆抑制,抑制类型为竞争型抑制。4.利用四氮唑盐还原法(MTT法),选用6种人肿瘤细胞宫颈癌(Hela)细胞,肝癌(HepG-2)、(SMMC-7721)细胞,人白血病(K562)细胞,乳腺癌(MCF-7)、(MDA-MB-231)细胞对分离得到的四个化合物(2-5)进行了体外细胞毒活性研究,结果表明化合物2对Hela细胞有中等抑制作用,IC50值为52.59μmol/L,化合物3对SMMC-7721细胞有弱抑制作用,IC50值为154.36μmol/L,化合物4对HepG-2细胞有弱抑制作用,IC50值为121.6μmol/L,化合物5对Hela细胞和肝癌SMMC-7721细胞都有中等抑制作用,IC50值分别为13.19μmol/L和46.17μmol/L。