【摘 要】
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目的:通过获得原代口腔鳞癌细胞中的CD133+肿瘤干细胞,比较CD133+细胞亚群和CD133-细胞亚群的生物学特性,探讨维持或提高CD133表达水平的培养条件,明确CD133作为口腔鳞癌干细胞表面标志物的临床意义。方法:用机械法从口腔鳞癌组织中培养获得8例原代口腔鳞癌细胞,分别应用流式细胞学分析和免疫荧光染色测定原代口腔鳞癌细胞中CD133表达情况。运用免疫磁珠分选法分离并纯化原代口腔鳞癌细胞中
【基金项目】
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项目名称:β肾上腺素能受体介导的信号通路对口腔鳞癌细胞的调控及其分,子机制研究项目合同编号:81460413,项目来源:国家自然科学基金,项目起止时间:2015年1月—2018年12月
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目的:通过获得原代口腔鳞癌细胞中的CD133+肿瘤干细胞,比较CD133+细胞亚群和CD133-细胞亚群的生物学特性,探讨维持或提高CD133表达水平的培养条件,明确CD133作为口腔鳞癌干细胞表面标志物的临床意义。方法:用机械法从口腔鳞癌组织中培养获得8例原代口腔鳞癌细胞,分别应用流式细胞学分析和免疫荧光染色测定原代口腔鳞癌细胞中CD133表达情况。运用免疫磁珠分选法分离并纯化原代口腔鳞癌细胞中的CD133+细胞亚群和CD133-细胞亚群。应用CCK-8法检测CD133+细胞亚群和CD133-细胞亚群体外增殖能力以及对顺铂化疗的耐受能力。Transwell法检测顺铂对CD133+细胞亚群和CD133-细胞亚群侵袭能力的影响。无血清培养法检测CD133+细胞亚群和CD133-细胞亚群的成球能力。无血清培养法和含血清培养法分别培养CD133+细胞亚群,流式细胞学分析检测CD133+细胞的比例变化。运用RT-PCR分析测定CD133+细胞亚群和CD133-细胞亚群的相关干细胞因子表达差异,在动物实验模型中验证CD133+细胞亚群和CD133-细胞亚群致瘤能力的差异。最后将移植瘤取出行HE染色和免疫组化。结果:本研究成功地从口腔鳞癌组织中获得原代口腔鳞癌细胞,流式细胞学分析检测到原代口腔鳞癌细胞含有极少比例的CD133+细胞亚群（0.37±0.08%）,免疫荧光染色分析显示CD133+细胞亚群和原代口腔鳞癌细胞中均表达CD133,两者相较具有统计学差异（p<0.01）。经免疫磁珠分选法可获得较纯的CD133+细胞亚群（93.79±5.01%）。与CD133-细胞亚群相比,CD133+细胞亚群具备较强的体外增殖能力（p<0.05）、顺铂化疗耐受能力（p<0.001）。相比于CD133+细胞亚群,顺铂对CD133-细胞亚群侵袭能力的影响更强（p<0.01）。在无血清培养条件下,CD133+细胞亚群表现出更强的干细胞成球能力。相较于含血清培养法,无血清培养法更能维持CD133的比例（p<0.05）。RT-PCR结果显示CD133+细胞较CD133-细胞表达更高的干细胞相关基因例如NANOG,SOX2,ALDH1A1和OCT4（p<0.001）。同时,在裸鼠体内成瘤实验中,CD133+细胞亚群以较少的数量级表现出较强的致瘤能力（p<0.05）。最后,CD133+移植瘤切片经HE染色证明是高分化鳞状细胞癌,免疫组化检测CD133+移植瘤切片CK呈阳性表达。结论:原代口腔鳞癌细胞中确实存在少量肿瘤干细胞,CD133阳性细胞具有肿瘤干细胞特性,CD133可能是口腔鳞癌肿瘤干细胞标记物之一,无血清培养法更能维持CD133的比例。
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