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骨髓造血组织功能抑制是肿瘤放疗与化疗的常见的副作用,也是高剂量核辐射事故的首要死亡原因,临床上表现为急性和慢性骨髓抑制。急性骨髓抑制即刻出现严重的症状,导致辐射事故受害者与放疗患者的死亡,或者使肿瘤放疗病人的病情恶化。慢性骨髓抑制起病隐匿,病情迁延并且难以康复,而且,由于临床对急性骨髓抑制的治疗掩盖这种难以逆转的骨髓损伤。由于骨髓功能抑制难以治愈,急需对其发病机制进行研究,为骨髓功能抑制的有效治疗与预防提供依据。众多证据表明造血细胞凋亡引发急性骨髓抑制,而造血干细胞的衰老被认为是骨髓长期抑制的主要原因,多项研究表明电离辐射激活p38 MAPK诱导造血细胞凋亡和衰老。
本研究以p38 MAPK的特异性抑制剂SB203580为研究对象,研究其对全身照射小鼠造血细胞的辐射保护作用,并初步探讨其作用的机制。包括三部分实验:1)SB203580对造血祖细胞和造血干细胞保护作用的观察:小鼠随机分为对照组、照射组及SB203580给药组,以6.0 Gy137Csγ射线全身均匀照射SB203580给药组和照射组的C57BL/6小鼠。收集并计数外周血红细胞、白细胞和血小板,以及单侧股骨骨髓有核细胞;骨髓细胞半固体培养法检测骨髓有核细胞增殖能力,卵石样造血集落形成实验检测造血干细胞增殖能力。2)SB203580的抗氧化作用:收集小鼠骨髓有核细胞,分组同上,照射组与SB203580给药组细胞进行1Gy体外照射,照射之后孵育过夜,酶标仪检测细胞内活性氧水平。3)SB203580对造血干细胞样细胞p16 mRNA表达的影响:磁珠分离小鼠系标记阴性骨髓造血细胞,分为对照组、照射组、照射+放线菌素D组、照射+SB203580组、照射+SP600125组,细胞照射剂量为4Gy。培养后去除悬浮细胞,消化贴壁细胞后重新贴壁取非贴壁细胞为干细胞样细胞,提取RNA,Real-time PCR检测p16与p21 mRNA的表达情况。
本研究观察到SB203580给药组外周血白细胞、血小板的数量分别比照射组高111.8%和157.7%(P<0.05); SB203580给药组骨髓有核细胞较照射组组高135.4%,CFU—GM升高188.5%(P<0.05),CAFC阳性细胞形成率较照射组高146.6%(P<0.01)。SB203580处理组体外受照骨髓有核细胞内活性氧较照射组低56.2%(P<0.05);放线菌素D可部分抑制p16mRNA表达,SB203580处理可完全抑制p16 mRNA升高。
综上所述,SB203580对照射造成的小鼠造血组织损伤具有一定的保护作用,这种保护作用可能与SB203580降低照射后骨髓有核细胞内活性氧水平和种造血干细胞样细胞内p16 mRNA表达有关。