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人血清白蛋白(HSA)是人血浆中所含蛋白质的主要成分,除了维持血液渗透压、抗凝血和清除自由基的功能外,在临床上广泛用于烧伤和严重失血等引起的休克、急性缺血性脑卒中、肾病综合症、肝硬化、肺性脑病、糖尿病性肾病和皮肤溃烂等。由于HSA治疗剂量大,且血液来源不足,导致产量无法满足市场需求。目前所建立的rHSA表达系统仍没有解决HSA来源短缺的问题,对此,本研究探索基因重组HSA的表达方式,通过对紫花苜蓿(Medicago SativaL.)和黑麦草(Lolium perenne L.)组织培养和植株再生条件的优化,分别建立了其遗传转化体系,通过农杆菌介导法将HSA基因分别导入紫花苜蓿和黑麦草中,经基因组PCR和Western blotting鉴定,获得了可表达rHSA的转基因紫花苜蓿株系和转基因黑麦草株系,为后续rHSA的分离纯化、理化性质分析和药理活性的鉴定奠定基础。取得的主要实验结果如下:1、根据人血清白蛋白基本序列构建植物表达载体,并通过电击法转化农杆菌菌株GV3101,经PCR鉴定获得阳性转基因工程菌GV3101-pCAMBIA1300-HSA。2、以人工选育的紫花苜蓿品种“游客”(Eureka)和“赛迪”(Sardi)的无菌子叶为外植体材料,进行遗传转化体系的建立,实验结果得出:(1)愈伤组织和胚性愈伤组织的诱导最适培养基为MS基本培养基+ 2 mg/L 2,4-D + 0.2mg/L KT+2g/L 酪蛋白水解物,3%蔗糖,pH5.8;(2)分化诱导最适培养基为MS基本培养基+0.5 mg/L KT+2 g/L酪蛋白水解物,3%蔗糖,pH 5.8;(3)生根培养基为1/2 MS培养基,1.5%蔗糖,pH 5.8。3、以人工选育的黑麦草品种“特高”的种子为外植体,进行遗传转化体系的建立,实验结果得出:(1)愈伤组织诱导最适培养基为MS基本培养基+ 5 mg/L 2,4-D + 0.2 mg/L 6-BA+ 2 g/L酪蛋白水解物,3%蔗糖,pH 5.8;(2)胚性愈伤组织诱导最适培养基为MS基本培养基+ 3 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L 6-BA +2g/L酪蛋白水解物,3%蔗糖,pH 5.8;(3)分化诱导最适培养基为MS基本培养基+ 2 mg/L 6-BA+ 0.1 mg/L NAA+ 2 g/L酪蛋白水解物,3%蔗糖,pH5.8;(4)生根培养基为1/2 MS培养基+0.1 mg/L IBA,1.5%蔗糖,pH 5.8。4、对农杆菌转化过程中菌体浓度和浸染时间进行梯度实验,结果表明紫花苜蓿转化最佳条件为菌液浓度为OD600 = 0.6,浸染10 min;黑麦草转化最佳条件为菌液浓度为OD600 = 0.6,浸染5 min。5、通过农杆菌介导法分别对紫花苜蓿和黑麦草愈伤组织进行转化,诱导筛选获得阳性转化植株,经基因组PCR和Western blotting检测最终确定HSA基因成功转入相应的紫花苜蓿和黑麦草植株中。经确定,转基因赛迪株系获得96株,转基因游客获得165株,转基因黑麦草(特高)获得119株。