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JNK是MAPK家族成员,其信号通路在细胞分化、增殖、凋亡、应激反应及多种疾病的发生发展中起着至关重要的作用。MAPK家族成员(ERK1/2、JNK、p38、ERK5等)在细胞癌变过程中可以通过其活性的增强或减弱发挥关键作用。同时,MAPK在肿瘤发生、发展中的作用还可能与亚细胞定位有关。越来越多的证据表明,JNK信号通路是正常细胞癌变的一个重要调节位点,在临床上JNK可以作为一个潜在的分子治疗靶点。但是JNK在癌变过程中的作用比较复杂,与细胞类型和特定环境密切相关。最近研究发现,JNK在细胞转化(transformation)与恶性生长(oncogenic growth)中可能发挥不同的作用。因此,研究JNK在不同类型肿瘤、肿瘤不同发展阶段中的作用机制变得格外重要。急性T淋巴细胞白血病(T-cell acute lymphoblastic leukemia,T-ALL)是血液/淋巴系统恶性肿瘤的一种,发病率低但预后差。尽管JNK是多种肿瘤包括B淋巴瘤的潜在治疗靶点,然而到目前为止,JNK在T-ALL细胞存活和增殖中的作用仍不清楚。因此,探讨JNK对T-ALL细胞恶性生长的调节作用具有重要的理论和实际意义。本研究选取八种急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞,在特异抑制和增强JNK活性的基础上,观测JNK的活性变化对白血病细胞分裂增殖、周期分布和凋亡诱导的影响,并初步探讨了JNK的作用机理,结果提示JNK在T-ALL细胞恶性生长过程中可能发挥促瘤作用,其微弱的本底活性通过在核浆中的重新分配促进T-ALL细胞恶性生长(oncogenic growth),并且JNK能够作为T-ALL治疗的潜在靶点。具体实验结果如下:1.利用两种不同的特异性抑制因子阻断JNK活性,能够抑制T-ALL细胞的存活和增殖、阻滞细胞周期进程、增强Fas抗体诱导的细胞凋亡,进而抑制T-ALL细胞在液体培养基和半固体培养基中的生长。与此一致的是,Fas抗体在JNK1-/- MEFs中诱导的凋亡显著强于野生型MEFs。2.通过基因转染和G418加压筛选,在T-ALL细胞Jurkat中稳定表达具有组成性JNK活性的JNKK2-JNK1融合蛋白,所获得的稳定表达株Jurkat-CJ1和Jurkat-CJ2低水平表达JNKK2-JNK1融合蛋白。较低水平地特异增强JNK活性能够加速T-ALL细胞的增殖;尽管在无死亡刺激的情况下,较低水平地特异增强JNK活性对T-ALL细胞的存活无明显影响;但在Fas抗体存在的情况下,较低水平地特异增强JNK活性使T-ALL细胞对Fas介导的凋亡具有一定的抗性。3. JNK在正常T淋巴细胞中的本底活化水平明显高于T-ALL细胞;正常T淋巴细胞中,JNK主要分布于胞浆,而在T-ALL细胞中,JNK既分布于胞浆,也分布于胞核。推测,JNK异常的核浆分布可能是T-ALL细胞中本底JNK活性异常核内聚集的主要原因。同时,本底JNK活性核内聚集也可能有利于维持T-ALL细胞中c-Myc和抗凋亡蛋白Bcl-2的蛋白表达水平,从而发挥促瘤作用。本论文在分析JNK与T-ALL细胞存活、增殖、凋亡的关系及JNK作用机理的基础上,揭示了JNK对于T-ALL细胞恶性生长是必需的,并且JNK通过异常的核浆定位和调节Bcl-2、c-Myc的表达水平发挥促瘤作用。我们的工作为以JNK作为该白血病治疗的潜在靶点提供了实验依据,同时丰富并加深了我们对JNK在肿瘤发生、发展过程中作用机制的理解。