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目的:
本研究从蛋白质组学整体的角度,探讨recombinanthumanbasicfibroblastgrowthfactor(rhbFGF)促进糖尿病(diabetesmellitus,DM)大鼠创伤愈合过程中,大鼠创伤皮肤蛋白质组的差异表达及其规律。初步筛选rhbFGF在糖尿病大鼠创伤愈合中发挥重要作用的目标蛋白质,为糖尿病皮肤溃疡的康复或辅助治疗提供新的借鉴。
方法:
实验动物分为4组,(1)正常组(N+NS);(2)正常+rhbFGF组(N+rhbFGF):(3)糖尿病组(DM+NS);(4)糖尿病+rhbFGF组(DM+rhbFGF)。动物饲养11周后,收集创口皮肤,沿直径切成两部分,一部分做病理切片,其他提取蛋白样品。采用双向凝胶电泳技术建立实验组与对照组的蛋白质组差异性表达图谱,选择差异表达量相差2倍以上蛋白质点作为备选的目标蛋白质,采用MALDI-TOF质谱仪进行肽链指纹图谱分析。
结果:
1.剪尾尖取血检测血糖≥16.7mmol/L,证实糖尿病模型成功。
2.本试验进行HE染色,发现治疗组创面组织成纤维细胞大部分转化为纤维细胞,毛细血管数少于对照创面,对照创面成纤维细胞增殖尚较活跃,纤维细胞数目少。
3.创口愈合率用IMAGEJ软件进行分析,发现治疗组创面愈合情况明显优于对照组,具有统计学差异。
4.使用ImageMaster2D软件对双向电泳结果进行分析,显示组内匹配性较好,组间匹配显示蛋白表达量相差2倍以上的斑点20个。
5.对20个差异蛋白进行MALDI-TOF质谱分析,根据trypsin酶解后进行肽段匹配,鉴别出18个有意义的蛋白。
结论:
1.HE染色结果显示rhbFGF对糖尿病大鼠创伤愈合具有一定的促进作用。
2.双向电泳技术能够对大鼠创伤皮肤蛋白进行有效的分离获得差异蛋白。
3.经质谱鉴定,确证18个目标蛋白质斑点,其中有与能量代谢相关的蛋白、骨架蛋白、酶抑制剂等相关蛋白,推测其可能参与rhbFG对糖尿病大鼠创伤愈合具有一定的促进作用,为深入研究rhbFG治疗糖尿病溃疡提供了基础性研究。