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目的:1、建立测定呼出气中丙泊酚浓度以及血浆中丙泊酚浓度的方法;2、研究呼出气中丙泊酚与血浆中丙泊酚浓度之间的关系。
方法:1、含丙泊酚气体标准品的制备:于真空配气瓶中充满一个大气压的高纯氮气,封闭配气瓶,加热至250℃,稳定l miN,微量注射器抽取l μl丙泊酚纯品注入配气瓶内,停止加热,自然冷却至25℃±2℃。气密注射器从配气瓶中取5 ml含丙泊酚的气体样本置于充满氮气的Tedlar采样袋内,配成ppm级别的丙泊酚气样。然后从中取含丙泊酚的气体样本于Tedlar采样袋内逐级稀释为含目标丙泊酚浓度的气体样本,分别为l,2,5,10,15ppb;2、顶空-固相微萃取-气相色谱-质谱法对气样与血浆中丙泊酚进行定性与定量分析:(1)顶空-固相微萃取-气相色谱-质谱法对气样中丙泊酚的定性与定量:1)取丙泊酚高浓度气样标准品5 ul注入一个密闭含氮气的样品瓶内,将固相微萃取头伸入样品瓶的顶空进行固相微萃取。固相微萃取一定时间后将萃取头插入气相色谱的进样口,热解吸后行全扫(SCAN),得出的色谱峰图与不含丙泊酚氮气样本的色谱峰图比照,并参照质谱库,得出丙泊酚的保留时间;2)优化丙泊酚萃取以及气相色谱与质谱的分析条件,得出测定丙泊酚的最优化条件;3)含目标丙泊酚浓度的气体样本(1,2,5,10,15ppb),每个浓度至少测5个样本,制备丙泊酚气体样本的标准曲线,为了测定丙泊酚气样标准曲线的日内精密度与只间精密度,选取高、中、低三个浓度,每个浓度至少连续测三天。(2)顶空一固相微萃取-气相色谱-质谱法对血浆中丙泊酚的定性与定量:1)抽取健康志愿者血液进行离心,将1%丙泊酚注入到所得血浆中,取ioU l含有丙泊酚的血浆注入一个真空密闭样品瓶内,伸入固相微萃取头于样品瓶顶空进行固相微萃取。萃取一定时间后将萃取头插入气相色谱的进样口,热解吸后行全扫(SCAN),得出色谱峰图后与不含丙泊酚的血浆样本的色谱峰图比照,同时参考质谱库,得出丙泊酚的保留时间;2)含0.2,1,2.5,5,10 u g/ml浓度的丙泊酚血浆样本,每个浓度至少测5个样本,从而制备血浆丙泊酚浓度的标准曲线。选取高、中、低三个浓度,每个浓度至少连测三天,得出血浆丙泊酚浓度标准曲线的日内精密度与日间精密度。3、测定临床上行丙泊酚麻醉患者呼出气与血中丙泊酚的浓度并在二者之间建立相关关系:(1)选择两例限期手术患者,插管后给与丙泊酚静脉麻醉维持,丙泊酚输注速率分为三个时段,分别为4、6、9 mg/kg/h,每个阶段持续60 min。(2)在改变输注速率前采集气样和血样,用HS-SPME-GC-MS法测定呼出气以及血浆中丙泊酚的浓度。(3)将得到的呼出气中丙泊酚浓度与相应时点血浆中丙泊酚浓度进行相关回归分析。
结果:1、气体样本标准曲线:丙泊酚峰面积=12820X丙泊酚气体浓度(ppb)+21588,R2=0.9555。2、血浆样本标准曲线:丙泊酚峰面积=97645×血浆中丙泊酚浓度(u g/ml) --41690,R2=0.9941。3、两名患者呼出气与血浆中丙泊酚浓度的相关方程分别为:呼出气中丙泊酚浓度(ppb) =1.1856X血浆中丙泊酚浓度(u g/ml) --3.9733,R2=0.8433;呼出气中丙泊酚浓度(ppb) =0.9255×血浆中丙泊酚浓度(u g/ml)-2.4142,R2=0.8849。
结论:1、利用顶空-固相微萃取-气相色谱-质谱法能够准确地对呼出气中丙泊酚进行定性与定量。2、利用顶空-固相微萃取-气相色谱-质谱法测定血浆中丙泊酚浓度具有快速、简便、准确的特点。3、丙泊酚全凭静脉麻醉患者的呼出气中丙泊酚浓度与血浆中丙泊酚浓度之间存在相关性。4、临床上或许可以通过测定呼出气中丙泊酚的浓度来监测血中丙泊酚的浓度从而反映丙泊酚麻醉深度。