第一部分:自噬应激参与了多巴胺能神经元的损伤机制　　目的:构建C57BL小鼠1-甲基，4-苯基，1，2，3，6-四氢吡啶（1-methyl–4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine，MPTP）急毒模型，观察帕金森病（Parkinson disease，PD）小鼠中的自噬水平，并深入研究自噬在PD发病机制中的作用。　　方法:14mg/kg MPTP腹腔注射（1d内分4次注射，每次间隔2h），构建C57BL小鼠MPTP急毒模型；同时采用雷帕霉素4mg/kg腹腔注射预处理给药3次作为自噬诱导剂预处理组。在造模后第7d对各处理组小鼠进行行为学评定（小鼠爬杆检测、小鼠转棒耐力检测）。免疫组织化学染色观察小鼠黑质及纹状体TH蛋白表达变化，透射电镜观察中脑黑质细胞超微结构变化。Western blot检测中脑黑质 TH和α-synuclein蛋白表达变化，自噬特异性蛋白微管相关膜蛋白轻链3（microtubule-associated protein light chain3，LC3）和自噬底物蛋白P62的表达变化。　　结果:（1）MPTP造模7d可引起小鼠爬杆时间延长，转棒潜伏期缩短，自噬诱导剂雷帕霉素可缓解MPTP导致的小鼠行为学功能损伤。（2）MPTP造模7d后，小鼠黑质及纹状体 TH阳性细胞减少，且中脑黑质 TH蛋白表达显著降低，α-synuclein表达增加，而自噬诱导剂雷帕霉素可缓解MPTP导致的小鼠DA能神经元损伤。（3）MPTP造模7d，小鼠中脑黑质可见线粒体肿胀损伤，同时可见双层膜的自噬体结构，而雷帕霉素预处理组可见较多的自噬体结构和溶酶体。（4） MPTP造模7d小鼠中脑黑质LC3-II蛋白表达增加，P62的表达也显著增加；雷帕霉素预处理可进一步上调LC3-II蛋白表达，同时减少P62蛋白的表达。　　结论: MPTP引起的自噬应激参与了PD小鼠的发病机制。自噬诱导剂雷帕霉素预处理可上调自噬水平，促进自噬流完成，改善 MPTP引起的自噬功能障碍，促进α-synuclein自噬降解从而对DA能神经元发挥保护作用。　　第二部分:自噬在帕金森病増龄易感性中的作用　　目的:构建不同月龄C57BL小鼠MPTP急毒模型，观察MPTP对不同月龄组PD小鼠的损伤作用，并研究自然増龄条件下自噬水平的变化及自噬在不同月龄PD小鼠发病机制中的作用。　　方法:3月龄和16月龄C57BL小鼠，均分为生理盐水对照组和PD模型组。在造模后第1、4、7天对各处理组小鼠进行行为学评定（小鼠爬杆检测、小鼠转棒耐力检测）。MPTP造模7d后免疫组织化学染色观察小鼠黑质及纹状体TH蛋白表达变化，透射电镜观察中脑黑质细胞超微结构变化，Western blot检测中脑黑质TH和α-synuclein蛋白表达变化，自噬特异性蛋白LC3、自噬底物蛋白P62和组蛋白去乙酰化酶6（Histone deacetylase6，HDAC6）蛋白的表达变化。　　结果:（1）与3月龄PD小鼠相比，16月龄PD小鼠在MPTP造模后1、4、7d爬杆时间均显著延长，且在MPTP给药第7d具有显著统计学差异；但小鼠转棒潜伏期在不同月龄PD小鼠没有统计学差异。（2）MPTP造模后7d，与3月龄PD小鼠相比，16月龄PD小鼠黑质和纹状体TH阳性细胞的缺失较为明显，TH蛋白表达也较低，α-synuclein的表达则显著增加。（3）MPTP造模7d后16月龄小鼠中脑黑质细胞内可见较多的脂褐素沉积，线粒体肿胀空泡化，且可见较多的变性神经元。（4）与3月龄生理盐水对照组相比，16月龄生理盐水对照组LC3-II和HDAC6的表达下降，P62的表达增加。（4）MPTP造模7d后，与16月龄生理盐水对照组相比，16月龄PD小鼠LC3-II、 P62和HDAC6的蛋白表达虽有增加但没有统计学差异；且与3月龄PD小鼠相比，16月龄PD小鼠LC3-II和HDAC6的蛋白表达显著下降。　　结论:老化可加剧DA能神经元损伤，16月龄小鼠对MPTP诱导损伤存在较高的敏感性。小鼠中脑黑质的自噬水平存在随龄性下降趋势。在3月龄小鼠中HDAC6介导的自噬应激可减弱MPTP引起的毒性作用，而16月龄小鼠的自噬失代偿导致了老龄小鼠对MPTP毒性作用的増龄敏感性。　　第三部分:帕金森病増龄易感性的自噬调控机制　　目的:构建不同月龄C57BL小鼠MPTP急毒模型，观察自噬靶向药物雷帕霉素和海藻糖对不同月龄组PD小鼠DA能神经元损伤的保护作用，并研究它们对不同月龄PD小鼠自噬的调控机制。　　方法:3月龄和16月龄C57BL雄性小鼠，均分为正常对照组、PD模型组、雷帕霉素溶剂对照组、雷帕霉素高剂量组、雷帕霉素中剂量组、雷帕霉素低剂量组和海藻糖组。在造模后第7d对各处理组小鼠进行小鼠爬杆实验，透射电镜观察中脑黑质细胞超微结构变化。Western blot检测中脑黑质TH和α-synuclein蛋白表达变化，自噬特异性蛋白LC3、自噬底物蛋白P62、HDAC6蛋白及溶酶体相关膜蛋白1（Lysosome-associated membrane protein-1，LAMP1）的表达变化。　　结果:（1）高、中、低三个不同剂量的雷帕霉素治疗后，均可缓解3月龄和16月龄PD小鼠爬杆时间的延长，但雷帕霉素改善行为学的作用在3月龄PD小鼠与其剂量大小成反比。（2）高、中剂量雷帕霉素治疗可诱导3月龄和16月龄PD小鼠中脑黑质细胞内形成自噬体。（3）雷帕霉素激活16月龄 PD小鼠自噬流和HDAC6的水平与其剂量大小成正比，高剂量的雷帕霉素治疗3月龄PD小鼠虽可较高地上调LC3-II和HDAC6水平，但其诱导的自噬流功能却并不是最强的。（4）不同剂量雷帕霉素均可上调3、16月龄小鼠 LAMP1的表达，且此作用在3月龄PD小鼠与其剂量大小成反比。（5）1mg/kg海藻糖可通过激活自噬流和溶酶体，促进α-synuclein自噬降解，进而对3月龄PD小鼠发挥神经保护作用，但它对16月龄PD小鼠却没有作用。　　结论:雷帕霉素和海藻糖治疗能够缓解3月龄PD小鼠的DA能神经元损伤，其机制与诱导自噬流促进α-synuclein自噬降解有关。在3月龄PD小鼠，鉴于低剂量雷帕霉素能够协同上调较高水平的LAMP1表达，低剂量雷帕霉素的神经保护作用最强。然而，由于老龄小鼠的低自噬代偿能力，需要较高剂量的自噬诱导剂治疗，对3月龄PD小鼠有效的海藻糖剂量对16月龄PD小鼠却没有作用。