研究背景癫癎是一种常见、慢性、复发性的神经科疾病,可以影响到各个年龄阶段、共约3%的人群。癫癎,尤其是癫癎持续状态可以对大脑多部位神经元进行有选择性的损伤,特别是在海马部位。这种神经元的损伤会使患者的认知(包括学习、记忆等)能力明显下降,从而对其生活质量和社会适应性等造成很大影响;并且这种损伤可以成为癫癎复发的一个重要因素。当抗癫癎药物或手术已经不能完全控制癫癎发作时,辅助性神经元保护剂的作用就体现出来了。G-CSF是最近几年研究比较热的神经元保护剂,以其多靶点多途径的功效引起大家的关注。我们的研究将阐明其是否在癫癎持续状态下有神经元有保护作用,对学习、认知能否改善等。目的:通过神经生物学研究方法,探讨粒细胞集落刺激因子在锂-匹罗卡品致癎大鼠模型中的神经元保护作用及可能机制,为癫癎辅助治疗提供新的思路。方法:1、实验动物处理及分组。分组:Control组(给以盐水注射)、G-CSF组(给予G-CSF注射)、L-P组(给予锂-匹罗卡品注射)、G+L-P组(给予G-CSF、锂-匹罗卡品注射)。G-CSF给药方法:G-CSF分别于制模前12h,癫癎终止时及终止后24h后给予。2、癫癎模型:锂-匹罗卡品诱导大鼠癫癎持续状态。3、致癎后14天进行水迷宫测试,观察G-CSF对癫癎持续状态模型大鼠的学习、记忆能力的改善。并用尼氏染色观察各组大鼠海马区神经元形态学变化。4、致癎后3天、5天处死大鼠,脑组织制成切片,用TUNEL法及免疫组织化学方法观察这个时间点上的海马神经元凋亡情况及凋亡相关分子的表达。5、致癎后6小时,24小时,48小时处死大鼠,取大鼠海马组织行Western blot检测,观察AKT凋亡通路和ERK凋亡通路的相关分子表达情况。6、从胎鼠大脑分离海马神经元,体外培养,以外源性G-CSF为刺激剂,观察其对神经元自分泌的影响。结果:1、致癎后15到20天时进行水迷宫测试,结果发现在测试第三天和第四天时,上台潜伏期在L-P组和G+L-P组之间有明显差异。第六天时L-P组大鼠在目标象限停留时间较正常组短,但与G+L-P组间无明显区别。2、致癎后14天时的尼氏染色提示,L-P组海马CA1区尼氏染色阳性细胞较正常组明显减少;G+L-P组阳性细胞虽然和正常组比较亦有减少,但是较L-P组有明显升高。3、在制模后第三天、五天时,G+L-P较L-P组TUNEL阳性细胞明显减少。4、在制模后第三天、五天时,G+L-P较L-P组BAX阳性细胞明显减少。5、在制模后第三天、五天时,L-P组BCL-XL分子表达明显减少,而G+L-P组减少相对较少。6、在制模后第三天,G+L-P较L-P组活化Caspase-3阳性细胞明显减少,但这种变化在五天时没能看到。7、Western blot检测提示G-CSF处理延长了P-AKT的表达时间,但是在ERK通路上并未发现G+L-P组和L-P组之间的区别。8、在一定浓度的外源性的G-CSF作用下,海马神经元自分泌G-CSF增加,形成正反馈。结论:1、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)增强了癫癎持续状态模型大鼠的学习、记忆能力。2、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对癫癎持续状态模型大鼠神经元有抗凋亡作用。这种抗凋亡作用与维持凋亡分子之间的平衡有关。3、AKT通路在G-CSF对癫癎持续状态模型大鼠神经元的抗凋亡作用中起着重要作用。而ERK通路作用尚不明确。4、海马神经元在外源性G-CSF作用下,自分泌G-CSF增强,从而延长其抗凋亡时相。