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研究目的：过度光照可诱导视网膜光损伤，从而导致视网膜、黄斑等部位发生退行性病变。MEG3（Maternally expressed gene3，MEG3）作为一个抑癌基因，与多种神经退行性疾病相关，且在多种肿瘤中缺少表达，本研究即通过长链非编码RNA-MEG3（long non-coding RNA MEG3，lncRNA MEG3）沉默探讨其对视网膜感光细胞的保护作用。 研究方法： 1、小鼠暴露于8000LUX强度的白光下，观察不同时间点MEG3的表达规律；小鼠视杆细胞（661w）暴露于2500LUX白光中，观察不同时间点MEG3的表达规律；661w细胞暴露于H2O2（100μmol/L）中，观察不同时间点MEG3的表达，以上均通过qRT-PCR检测MEG3的表达。 2、体内实验：C57BL/6J小鼠玻璃体腔分别注射Scr shRNA、MEG3shRNA、对照组（未注射），在光损伤2周后，qRT-PCR检测各组MEG3表达的变化；分别检查视网膜电图、Tunel（transferase-mediated deoxyuridine triphosphate-biotin nick end labeling，Tunel）、免疫荧光（anti-Rhodopsin），观察各组光感受器细胞的功能变化及光感受器凋亡的变化。 3、体外实验：661w细胞转染Scr shRNA、MEG3shRNA及对照组，后暴露于2500LUX的白光24小时，qRT-PCR（quantificational real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）检测各组MEG3表达的变化；MTT3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide，Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide，MTT）检查细胞活性；Calcein-AM/PI（钙黄绿素/碘化丙啶）染色测定细胞死亡。 4、机制研究：RNA Pull-down：通过生物素化的MEG3或反义MEG3RNA拉下实验，检测P53量的变化；在661w细胞的提取物中使用p53抗体进行RIP（RNA immunoprecipitation，RIP）实验；Western blot检测光损伤24h后661w细胞中Bax或Bcl-2表达；caspase3/7活性检测。 研究结果： 1、随着光照时间的增加，小鼠视网膜MEG3的表达水平增高；四组间差异有统计学意义。 2、体内实验：光损伤导致a和b波振幅明显降低，MEG3沉默可以减少光诱导视网膜功能下降；Tunel检测显示，光照导致了显著的视网膜细胞凋亡（Tunel阳性）数量增加，沉默MEG3的表达后，显著降低视网膜细胞的凋亡；在光损伤后视网膜外核层（outer nuclear layer，ONL）变薄，MEG3沉默后，外核层变薄程度减轻，MEG3沉默后对视网膜光损伤后光感受器细胞的保护作用；视网膜anti-Rhodopsin检测发现MEG3沉默组视网膜光损伤组视紫红质染色信号明显减少，MEG3沉默可明显减少视紫红质染色信号的减少。 3、体外实验：661w细胞转染了MEG3干扰病毒后，MEG3的表达明显降低：MTT法显示MEG3沉默部分提高了光诱导661w细胞的存活率。通过Hoechst33342染色和Calcein-AM/PI染色再次确认了，MEG3沉默显著降低了光诱导视网膜细胞死亡。 4、机制研究：MEG3能够在p53-MEG3蛋白复合体中与MEG3相互作用；使用p53抗体进行RIP实验，实时荧光定量PCR检测表明，p53存在于MEG3基因复合物中，RNA pulldown和RIP实验揭示了p53和MEG3的直接相互作用；MEG3沉默显著上调抗凋亡蛋白（Bcl-2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2））和下调促凋亡蛋白（Bax（Bcl-2Associated X Protein,BAX））表达；MEG3沉默显著降低caspase3/7（cysteinyl aspartate specific proteinase，caspase）活性。 研究结论： 光刺激视网膜无论在体内还是体外均可导致MEG3表达明显上调，MEG3沉默可减少视网膜光损伤；在体外，MEG3沉默可保护661w细胞对光诱导的细胞调亡；MEG3通过p53介导的转录通道调节感光细胞凋亡。