【摘 要】
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紫杉醇是红豆杉属植物中的一种复杂的次生代谢产物,因其独特的抗癌活性而受到各国科学家和研究人员的关注,但由于从红豆杉植物中提取紫杉醇产量极低,因此寻求大量生产紫杉醇
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紫杉醇是红豆杉属植物中的一种复杂的次生代谢产物,因其独特的抗癌活性而受到各国科学家和研究人员的关注,但由于从红豆杉植物中提取紫杉醇产量极低,因此寻求大量生产紫杉醇的方法也就成为研究的热点。而在众多研究方法中采用工业发酵法产紫杉醇因其产量高,环境污染小,社会效益高,而备受推崇。本文以产紫杉醇内生真菌HD86-9为菌种,以提高紫杉醇产量为目的。其中包括对产紫杉醇发酵条件进行优化、采用简化的分离纯化方法,快速分离纯化紫杉醇,以减小过分离纯化其中的损失。其主要研究结果如下:1、运用响应面方法对发酵培养基进行优化研究,结果显示最佳培养基成分为:葡萄糖 50g/L、NH4NO3 7g/L、MgSO4 0.5g/L、KH2PO4 0.5g/L、Cu(NO3)28.8×10-3g/L、ZnSO41.9×10-3g/L、FeCL3 10.1×10-3g/L、乙酸钠 1g/L、Ca(NO3)20.25g/L、苯甲酸钠5×10-3g/L,在此条件下发酵得到紫杉醇的产量为290.5μg/L。2、从六种不同的大孔树脂中选择出201×4型号大孔吸附树脂对紫杉醇进行除杂脱色研究,通过对洗脱剂、洗脱浓度的研究,采用最佳方法,使紫杉醇回平均收率为98.25%。3、在初步分离的基上,进一步运用硅胶及碱性氧化铝层析效果,提高紫杉醇的纯化成度。分别对洗脱液组成、洗脱液强度、洗脱速率进行研究,在最佳条件下,经硅胶柱分离后的紫杉醇的回收率在98.28%,纯度达到20.15%,而氧化铝层析后,紫杉醇回收率紫杉醇平均回收率为98.67%,纯度提高到25.48%。4、利用UPLC-MS中的MRM方法对紫杉醇纯化品进行测定,其中紫杉醇平均含量为244.196μg/L,RSD=0.53%,平均加标回收率为94.20%。经本工艺分离纯化后的紫杉醇总回收率约为84%。
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