VEGF164与EGFP双基因共表达的优化新型HIV-1慢病毒载体治疗大鼠急性脑缺血

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脑梗死是神经系统最常见的疾病,发病率、致残率和病死率均很高,严重地危害人类的健康和生活质量。目的:本研究旨在将VEGF164与EGFP双基因共表达的优化新型HIV-1慢病毒载体注入大鼠短暂性脑缺血再灌注模型,探讨VEGF在急性局灶性脑缺血疾病治疗中的作用。方法:实验组使用线栓法制备Wistar大鼠左侧大脑中动脉缺血再灌注模型。假手术组除不插线栓外,操作步骤与实验组相同。实验动物分组:取体重250-300g健康成年雄性Wistar大鼠100只,随机分5组:正常组大鼠8只(A组),假手术组8只(B组),单纯缺血组24只(C组),PBS治疗组24只(D组),VEGF164与EGFP双基因共表达的优化新型HIV-1慢病毒载体治疗组36只(E组)(按梗塞后不同取材时间分为1d、3d、7d、14d,4个检测时间点)。①行MCAO模型的大鼠术后行神经行为学评分,1~3分者入选实验。②大鼠于预定时间点断头取脑,使用TTC染色观察脑梗塞范围。③HE染色光镜观察大脑中动脉缺血大鼠脑组织病理学改变。④免疫组化SP法测定各脑区VEGF、CD34和CD133的表达。显微镜下观察阳性表达情况。应用SPSS18.0软件对结果进行统计学分析。⑤检测EGFP免疫荧光的表达。结果:①成功制备了大鼠左侧大脑中动脉局灶性缺血再灌注模型。②神经行为学评分:E组神经行为学评分较其它各组明显降低,尤其是在治疗7天后。③TTC染色脑梗死体积:C与D组间无统计学差异,E组梗死体积明显小于C组和D组,有统计学差异(P<0.05)。④VEGF、CD34和CD133的表达:E组VEGF和CD34含量明显增高,与各组相比均有统计学差异(P<0.05),各组未见CD133的表达。⑤免疫荧光:VEGF治疗组有荧光表达,余各组无荧光表达。结论:①VEGF164与EGFP双基因共表达的优化新型HIV-1慢病毒载体治疗急性缺血性脑卒中有较好的疗效,促进新生血管形成,挽救缺血半暗带,明显改善神经损伤。②VEGF164与EGFP双基因共表达的优化新型HIV-1慢病毒载体治疗急性缺血性脑卒中能够明显缩小梗死体积,减轻神经细胞和间质水肿,促进神经功能恢复。
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