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背景：Neuropilin-1(NRP-1)属于跨膜糖蛋白,作为轴突导向因子(Semaphorin,Sema)的受体,在神经细胞导向、轴突生长方面发挥调节作用。近年来,大量研究结果显示NRP-1可表达于新生血管的内皮细胞和多种肿瘤细胞。NRP-1在胶质瘤的各个发展阶段都有较高的表达,并影响肿瘤的发生发展。研究表明,NRP-1作为跨膜糖蛋白,在胶质瘤内涉及独立的细胞信号通路;NRP-1对胶质瘤细胞的增殖、迁移和转移具有抑制作用。
目的：制备高纯度和高特异性的NRP-1单克隆抗体(NRP-1 Mab);检测胶质瘤细胞株U251、U87、C6及胶质瘤组织中NRP-1蛋白的表达情况;研究NRP-1 Mab对胶质瘤细胞的增殖、迁移、侵袭等的抑制作用;探讨NRP-1 Mab在胶质瘤裸鼠模型的肿瘤靶向作用和抑制效应。
方法：利用Balb/c鼠生产NRP-1 Mab,rProtein A纯化抗体,ELISA鉴定活性。培养胶质瘤细胞株U251、U87和C6,免疫印迹法(Western blot)及细胞免疫组化检测NRP-1蛋白在胶质瘤细胞株和胶质瘤组织的表达。细胞抑制实验、划痕实验、transwell实验等研究NRP-1 Mab对胶质瘤细胞的增殖、迁移、侵袭等的作用。荧光素标记NRP-1 Mab后,进行胶质瘤裸鼠模型(U87)的活体成像,观察NRP-1Mab的肿瘤靶向性。用NRP-1 Mab治疗胶质瘤裸鼠模型(U87),观察肿瘤的生长情况。
结果：rProtein A纯化的NRP-1 Mab纯度高达95％,滴度1×10-6-5×10-6。胶质瘤细胞株(U251、U87、C6)的Western blot实验结果显示,NRP-1 Mab能特异结合NRP-1蛋白;细胞免疫荧光染色显示NRP-1 Mab定位于细胞膜。体外细胞实验结果显示,NRP-1 Mab对胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭具有抑制作用。胶质瘤裸鼠模型(U87)的活体成像显示,NRP-1 Mab能特异靶向肿瘤组织:治疗实验表明NRP-1 Mab对胶质瘤的生长有抑制作用。
结论：
1.本实验成功制备了高纯度和高特异性的NRP-1 Mab。
2.NRP-1 Mab能结合在胶质瘤细胞株(U251、U87、C6)的细胞膜上。
3.NRP-1 Mab对胶质瘤细胞的增殖、迁移、转移等有抑制作用。
4.NRP-1 Mab具有肿瘤靶向性和抑制肿瘤生长的效应,为深入开展胶质瘤靶向治疗的研究奠定了基础。