睾丸间质细胞作为雄性体内最主要的雄激素来源，其发育过程及功能受到了各种环境因素的影响。其中已证实塑化剂邻苯二甲酸酯可以显著抑制雄性体内睾酮水平，并进一步影响雄性生殖系统的发育与功能，但其中机制尚未完全清楚。并且大鼠青春期睾丸间质细胞的发育过程可以通过二甲磺酸乙烷(EDS)模型来模拟。因此本研究以EDS模型为中心，探讨EDS处理后再生的睾丸间质细胞谱系中各细胞类型的比较以及EDS模型中邻苯二甲酸酯对睾丸间质细胞数目及功能的影响及其机制。实验分为三个部分:　　(1)大鼠二甲磺酸乙烷处理后再生的睾丸间质细胞谱系中各细胞类型的比较　　本部分实验的目的是纯化EDS处理后再生的睾丸间质细胞，并比较它们的类固醇合成能力。从EDS处理后21、28和56天的睾丸中分别分离再生的睾丸间质祖细胞(RPLCs)、未成熟睾丸间质细胞（RILCs）和成年睾丸间质细胞(RALCs)。在RPLCs、RILCs和RALCs的培养基中加入100 ng/ml促黄体生成素体外培养3h后测定雄激素包括雄酮、5α-雄烷-17β，3α-二醇(DIOL)、睾酮和雄烯二酮的生成率。检测这些细胞中类固醇合成酶的活性及其mRNA水平。发现从正常90天龄大鼠的睾丸中分离的成年睾丸间质细胞(ALCs)主要产生睾酮(69.73％)，与其相比，RPLCs和RILCs分别主要产生雄酮(70.21％)和DIOL(69.79％)。EDS处理后56天大鼠睾丸中分离的睾丸间质细胞表现出与ALC相似的类固醇合成能力，主要产生睾酮(72.90％)。RPLCs具有胆固醇侧链裂解酶（由Cyp11a1编码）活性、3β-羟基类固醇脱氢酶1（Hsd3b1编码）和17α-羟化酶(Cyp17a1编码)，但17β-羟基类固醇脱氢酶3(Hsd17b3编码)和11β-羟基类固醇脱氢酶1(Hsd11b1编码)的活性几乎检测不到。而RILCs增加了17β-羟基类固醇脱氢酶3和11α-羟基类固醇脱氢酶1的活性。由于RPLCs和RILCs具有较高的5α-还原酶1和3α-羟基类固醇脱氢酶的活性，因此他们主要产生5α-还原性的雄激素。Real-time PCR也证实了这些类固醇合成酶的mRNA表达具有相似的趋势。总之，纯化的RPLCs、RILCs和RALCs与大鼠的青春期发育过程具有相似性。　　(2)邻苯二甲酸酯促进成年大鼠干细胞向睾丸间质细胞谱系的分化　　本部分实验的目的是研究邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯（DEHP）增加睾丸间质细胞数目的作用机制。90天龄Long-Evans大鼠随机分为3组，分别采用玉米油、10或750 mg/kg/day DEHP灌胃7天，并在7天末腹腔注射75 mg/kgEDS以消除睾丸间质细胞。EDS处理后4天对照组睾丸中的睾丸间质细胞完全消除，可以通过检测不到的血清睾酮水平以及睾丸间质细胞标志物如3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)、Lhcgr、Cyp11a1、Cyp17a1、Insl3和Hsd11b1的mRNA表达进行判断。然而，我们检测了大鼠DEHP处理组的睾酮水平以及3βHSD阳性细胞、Lhcgr、Cyp11a1和Cyp17a1的表达水平。这些3βHSD阳性细胞不具有成年睾丸间质细胞的生物标志物如11β-羟基类固醇脱氢酶1染色以及Insl3、Hsd17b3和Hsd11b1的表达，这表明3βHSD阳性细胞是在睾丸间质祖细胞阶段新形成的。目前的研究表明，DEHP促进睾丸间质干细胞向睾丸间质祖细胞的分化。　　(3)邻苯二甲酸酯对成年大鼠睾丸间质细胞再生的抑制作用　　本部分实验的目的是确定成年大鼠DEHP暴露是否影响睾丸间质细胞的再生。90天龄Long-Evans大鼠腹腔注射75 mg/kg EDS，以消除成年睾丸间质细胞，然后随机分为3组，分别采用玉米油（对照）、10或750 mg/kg/day DEHP灌胃35天。通过RIA法检测血清睾酮和LH，评价睾丸间质细胞数目与增殖率，通过qPCR法测定睾丸间质细胞特定基因的mRNA水平。EDS处理后14、21和35天，10和750 mg/kg DEHP处理组的睾丸间质细胞数目增加，由于EDS处理后14至21天显著增加了睾丸间质前体细胞的数目。然而，EDS处理后35天时，与对照组相比尽管增加了睾丸间质细胞数目，但10和750 mg/kg DEHP处理组的血清睾酮水平减半。定量PCR结果显示，EDS处理后21天，750 mg/kg DEHP处理组的睾丸间质细胞特异性基因包括Lhcgr、Cyp11a1、Hsd3b1和Insl3均显著下调。目前的研究表明，DEHP促进睾丸间质细胞增殖，但抑制睾丸间质细胞再生过程中的分化。