虾青素对红小丑鱼体色的影响

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红小丑鱼学名白条双锯鱼(Amphiprionfrenatus),隶属于雀鲷科(Pomacentridae)海葵鱼亚科(Amphiprioninae)双锯鱼属(Amphiprion),是近几年兴起的重要热带观赏鱼类种类之一。红小丑鱼体型梭形,体色主要为红色,其眼睛后方有一条白色的项圈,似京剧中的“丑角”,故名红小丑鱼。因其体色接近番茄的颜色,又名番茄小丑。人工不恰当捕捞导致野生小丑鱼数量急剧骤减,同时海水水族爱好者日益增多,催化人工繁育小丑鱼产业的发展,大量的人工繁殖幼苗流通于观赏鱼市场。此时,体色成为衡量其价值一种重要手段。为培育出高品质、体色和野生小丑接近的品种,养殖户常用虾青素来调控鱼类体色。而虾青素添加在饲料中成本较高,且过量的虾青素可能也会使鱼类出现代谢压力。目前关于红小丑鱼体内虾青素代谢规律的研究还较少。本实验通过使用不同浓度的虾青素来投喂红小丑鱼,研究虾青素在鱼体内的沉积和降解规律,摸索海洋观赏鱼养殖过程中虾青素的最适投喂量。此外,本实验还分析了虾青素降解过程中色素合成相关基因Tyrp1表达量的变化规律,为后续开展小丑鱼体色相关基因的研究奠定基础。  1.以红小丑鱼的皮肤和鳍为试验材料,通过液液萃取和氨基固相萃取技术,使用高效液相色谱法定量测定红小丑鱼组织中的虾青素和叶黄素含量。结果显示:样品经丙酮提取,甲基叔丁基醚萃取,纯水分离杂质,LC-NH2净化,C18色谱柱分离,流动相为甲醇:水(98:2,v/v),紫外检测波长475nm,外标法定量。虾青素和叶黄素标准品0.02~1μg/ml线性关系良好,虾青素相关系数为0.998,叶黄素相关系数为0.999,加标回收率分别为79.92%~90.32%和78.51%~97.60%,相对标准偏差分别为6.6%和12.4%。  2.以初始体重为(4.88±0.90)g,体长为(4.85±0.32)cm的红小丑鱼(A.frenatus)为养殖对象,在循环水自然光下进行养殖。设计实验组和对照组,对照组投喂不添加虾青素的饲料,实验组投喂添加2‰,4‰,6‰,8‰虾青素含量的饲料,以每组三个统计学水平重复,试验周期为20天。结果发现:(1)添加虾青素组的红小丑鱼胃肠消化酶活性均高于未添加虾青素组,当虾青素的添加量为6‰-8‰胃肠道的消化酶出现较高活性,结果说明虾青素对红小丑鱼的健康活性有着积极的影响,在一定的范围内,随着虾青素含量的升高,这种影响也随之增大。(2)试验组和对照组相比,红小丑鱼体表红度值a*差异显著(P<0.05);虾青素添加量为8‰时,红度值a*达到最高。背腹部黄度值b*值在6‰时最高,当高于6‰,其值下降,且不同虾青素添加量对鳍的b*值没有显著影响。此外,不同虾青素添加量对红小丑鱼体表的L值也无显著影响。(3)鱼皮肤和鳍中虾青素沉积量变化趋势和色度值a*值变化规律大体相似,皮肤中沉积的虾青素含量随着其在饲料中添加量的增加而增加,鳍沉积虾青素出现先上升再下降的趋势。添加虾青素后鱼鳍中能检测到叶黄素,6-8‰与0‰(对照组)相比差异极为显著(P<0.01),而皮肤中未曾检测到叶黄素。由此可得出增色过程中,虾青素的投喂量为6-8‰最为适宜。  3.为研究虾青素在红小丑鱼体内的降解规律,选用平均体长(3.8±0.2)cm,平均体重(1.2±0.2)g的红小丑鱼作为实验鱼,实验鱼先暂养一段时间,以8‰虾青素含量的饲料饲养至体色稳定,立即停喂虾青素,取样作为对照组(0d),之后分别在3d、6d、13d、21d时取样一次,测定鱼体表的a*和b*值,体表组织虾青素和叶黄素的含量,以及色素合成相关基因Tyrp1相对表达量。结果显示:(1)随着停止投喂虾青素的时间延长,鱼体的a*和b*值逐渐降低(P<0.05),3d降低值最大,之后降低值减小。(2)皮肤、鳍中虾青素和叶黄素随着停止的时间延长均逐渐降低,此外,两者的降解趋势相似,3d降解值最大,6d降解变小,虾青素和叶黄素依然处于降解趋势,但是降解的差异不显著(P>0.05)。相比于3d降解差异显著(P<0.05),13d,21d降解速率继续降低,降解差异不显著(P>0.05)。(3)皮肤、鳍、肌肉Tyrp1在虾青素停止投喂后21d表达量最高。随着虾青素停止投喂时间的延长,皮肤、鳍、肌肉Tyrp1表达量在3d、6d、13d、21d逐渐上调。皮肤Tyrp1表达量在13d上调差异显著(P<0.05),鳍部组织Tyrp1在6d表达量上调差异显著(P<0.05),肌肉组织中Tyrp1在13d表达量上调差异显著(P<0.05)。
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