miRNA-135b的表达对乳腺癌细胞增殖和侵袭迁移的影响及靶基因研究

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【目的】通过抑制高表达mi RNA-135b乳腺癌细胞系中mi RNA-135b的表达观察乳腺癌细胞系增殖、侵袭及迁移的变化并探讨mi RNA-135b可能调控的靶基因。【方法】通过实时荧光定量(RT)-PCR检测mi RNA-135b在正常乳腺细胞系Hs578Bst及乳腺癌细胞系Hs578T、MCF7、HCC1937、MDA-MB-231、MDA-MB-453、BT-549和MDA-MB-468中的表达,选取高表达mi RNA-135b的乳腺癌细胞系为研究对象,根据处理方法,实验分三组:空白组(自然生长细胞)、阴性对照组(转染阴性对照试剂)、实验组(转染mi RNA-135b抑制剂)。采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)实验、Transwell体外侵袭实验检测乳腺癌细胞增殖、侵袭及迁移能力;RT-PCR及Western-blot检测APC基因的表达。【结果】mi RNA-135b在三阴型乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MDA-MB-453、MDA-MB-468和BT-549中的表达量均高,其中在MDA-MB-231中(P=0.001),在MDA-MB-468中(P=0.036);以乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MDA-MB-468为研究对象,细胞转染5d后,增殖活性结果示:实验组细胞增殖活性明显受到抑制MDA-MB-231中(P=0.00),MDA-MB-468中(P=0.01),差异有统计学意义;Transwell法检测结果示:与两对照组相比,实验组侵袭及迁移能力明显降低MDA-MB-231中(P=0.002,P=0.00),MDA-MB-468中(P=0.01,P=0.00),差异有统计学意义;APC基因m RNA表达结果示:以空白组为参照,MDA-MB-231阴性对照组1.01±0.11,实验组1.75±0.13;MDA-MB-468阴性对照组1.05±0.09,实验组1.63±0.12。APC基因蛋白表达结果示:MDA-MB-231空白组0.59±0.09,阴性对照组0.60±0.01,实验组0.62±0.08;MDA-MB-468空白组0.57±0.01,阴性对照组0.59±0.01,实验组0.61±0.02实验组APCm RNA及其蛋白的表达显著上调MDA-MB-231(P=0.013,P=0.021),MDA-MB-468(P=0.017,P=0.014)差异有统计学意义。【结论】mi RNA-135b在三阴型乳腺癌细胞中高表达,并靶向APC基因促进三阴型乳腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移。
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