随着人类基因组计划的完成,人类已经进入基因革命的时代。特定序列DNA的检测对于简单的疾病诊断和重大的医疗评估都有着巨大的研究价值,因此,需要发展一系列简单、灵敏、便携的DNA诊断设备。这些设备不仅可以在实验室分析中起作用,而且在临床诊断、环境监测、食品污染、法医等领域也发挥着重要的作用。本文致力于核酸检测新方法研究,发展了两种核酸分析新方法与一种端粒酶活性检测新技术。1金纳米聚沉的银放大方法用于DNA可视化比色分析方法发展了一种新的DNA可视化比色分析方法。该方法巧妙地结合金属离子稳定的分子信标与基于金纳米粒子增强的银放大方法。这种检测策略利用目标DNA与汞离子对连接DNA的竞争反应。当不存在目标DNA的时候,连接DNA可以与汞离子结合,形成一个分子信标。这个分子信标可以避免腺苷酸功能化的金纳米粒子的聚沉。而当存在目标DNA时,它与连接DNA的结合能力大于汞离子,目标DNA与连接DNA的结合就会打开分子信标。这时,打开的分子信标就会与金纳米粒子上的腺苷酸杂交反应,造成金纳米粒子的聚沉。而金纳米粒子的聚沉会减弱银增强的效果从而减小玻板上的点的相对灰度值。最后利用扫描法检测,就可以方便地检测目标DNA的浓度,线性范围从1.0-30nM。在相同汞离子的浓度下,单碱基错配的DNA相对灰度值只有完全匹配DNA的22%,显示了良好的选择性。这种利用金属离子稳定的分子信标的新型DNA比色检测方法,具有简单、价廉、方便的优点,在临床应用上具有巨大的潜力。2.基于目标增强放大与滚环扩增的超灵敏核酸检测新方法用量子点作为电化学标记物,结合内切酶放大技术和滚环扩增放大技术,发展了一种超灵敏的电化学检测方法。目标DNA、帮助DNA及分子信标三者会生成-个稳定的Y型结构,这种结构可以被切口内切酶所识别。被内切酶剪开的分子信标可以作为滚环扩增反应的初始引物。而DNA功能化的量子点可以通过杂交反应连接上滚环扩增的产物。这样,通过稀硝酸溶解量子点,与目标浓度相关的电化学信号可以方便地用方波伏安法读出。由于采用了特异性好的标记DNA方法与级联信号放大策略,本方法的检测下限可达11aM并有六个数量级的线性范围(1×10-17到1×10-11M),而且可以特异性地识别错配DNA。这种灵敏特异的DNA检测方法在基因研究中有着巨大的应用潜力。3.基于酶放大细胞中端粒酶活性检测结合分子信标技术和内切酶放大技术发展了一个简单方便的Hela细胞中端粒酶活性检测的新方法。通过引物在端粒酶的存在下会扩增出特定序列的性质,再结合酶放大技术,可以方便地通过荧光方法来检测端粒酶的活性。本方法可以检测出10-1000个Hela细胞中端粒酶的活性,是一种方便、简单的端粒酶活性检测方法。