中药外用治疗创伤愈合历史悠久,疗效独特。虽然现代医学技术不断发展,但中药在创伤愈合治疗中仍然应用广泛,并且随着细胞学与分子生物学的发展,有关中药治疗机理方面的试验研究逐渐增多,并取得了相当可观的成果,使得中药的应用更加精准和合理。本实验室根据历代医家总结出的感染创治疗原则:“活血祛淤,化腐生肌”,经科学组方、严格筛选,以儿茶、黄芪、黄柏、血竭、乳香、没药等的提取物为主要成分,制成复方儿茶凝胶剂,并通过动物试验观察其对感染创的治疗效果,初步探究其作用机理,为临床研发新的促进创伤修复中药配方提供更好的理论依据。试验目的:通过观察复方儿茶凝胶对犬感染创的治疗效果及对创面炎症细胞、修复细胞、成纤维细胞生长因子-2(Fibroblastgrowth factor-2,FGF-2)、血管内皮细胞生长因子-A(Vascular endothelial growth factor-A,VEGF-A)和转化生长因子-β1(Transforming growthfactor-β1,TGF-β1)等的调控作用,从细胞和生长因子角度探讨复方儿茶凝胶对感染创愈合的作用机理。试验方法:(1)药物制备:采用正交试验进行处方筛选,根据试验指标和感官指标进行评分,制备复方儿茶凝胶。(2)动物模型建立:采用金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌感染犬背部全层切开创,建立犬感染创模型。(3)临床试验:12只试验犬随机分为4组,即阴性对照组,磺胺嘧啶锌组(阳性对照组),高、低剂量复方儿茶凝胶剂组(高剂量组、低剂量组),每组3只犬,每只犬8个创面。试验犬造模成功后,分别使用上述药物治疗,每天1次,连续治疗14d。在用药第3、7、14 d分别对伤口局部组织采样,进行组织病理学观察。(4)机理研究:试验分组治疗及采样同临床试验,并采用实时荧光定量PCR技术(Quantitative Real-timePCR,qPCR)和免疫组织化学染色(Immunohistochemicalstaining,IHC)方法对创面组织中FGF-2、VEGF-A、TGF-β1 mRNA和蛋白表达量进行检测。试验结果:根据中医“活血化瘀,祛腐生肌”原则制备的复方儿茶凝胶剂粘附性好、易吸收、使用方便舒适、易清洗。使用金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌混合感染犬背部切除创,成功构建犬的感染创模型。高剂量组和阳性对照组创面愈合率、愈合时间均明显优于低剂量组和阴性对照组(P<0.01)。用药早期,高剂量组和阳性对照组创面聚集更多的中性粒细胞和巨噬细胞,且成纤维细胞出现时间较其他两组早,随后高剂量组和阳性对照组新生大量血管,肉芽填充、基质沉积较多,上皮化完整。实时qPCR和IHC结果显示,用药前期高剂量组和阳性对照组创面组织FGF-2、VEGF-A和TGF-β1 mRNA和蛋白表达迅速升高并维持在较高水平,愈合后期逐渐下降,低剂量组和阴性对照组表达水平持续缓慢上升,始终低于高剂量组和阳性对照组。结论:高剂量复方儿茶凝胶剂可调节炎性细胞浸润,促进创面炎症向增殖期的转变,促进表皮细胞迁移、成纤维细胞增殖、血管生成、胶原沉积,加速创面愈合。高剂量复方儿茶凝胶可通过较早地上调并维持创面组织中FGF-2、VEGF-A、TGF-β1 mRNA和蛋白表达水平,刺激炎症细胞和修复细胞的迁移、增殖,从而加快肉芽形成、上皮化过程,同时刺激胶原沉积形成胞外基质,为创面组织结构提供稳定性;修复后期适当下调生长因子水平,抑制炎症反应,防止基质过度沉积,瘢痕过度增生。