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目的:①对Neuritin酵母表达产物进行结构分析鉴定;②从细胞水平上探讨Neuritin酵母表达产物对细胞凋亡、增殖和迁移等生物学行为的影响,为进一步探讨Neuritin的生物学功能及作用机制奠定基础。
方法:⑴用Western-blot鉴定酵母工程菌株GS115/ pPIC9K-neuritin的表达产物的免疫原性;⑵采用生物质谱技术对Neuritin酵母表达产物进行蛋白质分子量、氨基酸全序列测定等结构鉴定与分析;⑶通过Annexin V-PI双染法、MTT比色法、细胞划痕实验等分别观察Neuritin酵母表达产物对BMSCs细胞凋亡、增殖和迁移等细胞生物学行为的影响。
结果:①Western-blot结果显示:酵母工程菌株GS115/ pPIC9K-neuritin的表达产物有免疫原性;②生物质谱技术测定蛋白质分子量为10957.705 Da,和预期分子量一致,氨基酸全序列鉴定结果与Neuritin酵母表达产物的理论序列一致;③Annexin V-PI双染法检测早期凋亡结果显示:Neuritin酵母表达产物抑制BMSCs细胞早期凋亡;④MTT比色法结果显示:Neuritin酵母表达产物与BMSCs数量呈负相关,使部分BMSCs的形态出现类神经元样改变;⑤细胞划痕实验结果显示:Neuritin酵母表达产物可促进细胞的迁移。
结论:⑴鉴定了Neuritin酵母表达产物的结构;⑵Neuritin酵母表达产物可抑制BMSCs衰老和早期凋亡;影响BMSCs增殖;⑶Neuritin酵母表达产物可促进BMSCs细胞的迁移。