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目的:利用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(surface enhancedlaser desorption& ionization time-of-flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)建立甲型副伤寒沙门氏菌蛋白指纹图谱,并通过与分子生物学方法鉴定结果比较,验证其诊断效率,为快速鉴定该细菌提供新的思路。 方法:1.收集从临床中分离获得的甲型副伤寒沙门氏菌36株。2.对所收集的细菌利用16S rRNA测序技术进行分子生物学鉴定。3.利用表面增强激光解析电离飞行时间质谱检测细菌蛋白,ProteinChip和Biomarker Wizard软件自动采集数据,并分析所得的细菌蛋白指纹图谱。4.对同一株细菌的蛋白进行多次检测并分析其蛋白指纹图谱差异,评价方法的重复性。5.同种细菌不同株之间蛋白指纹图谱差异进行比较,对细菌蛋白表达的稳定性进行分析。6.通过比较不同培养时间下细菌蛋白指纹图谱差异,验证培养时间对细菌蛋白指纹图谱的影响。7。将132株菌株分成训练组和验证组,分别检测其蛋白表达,分析其蛋白指纹图谱,将结果用BioMarker Patterns软件建立分类树鉴定模型,并进行盲法验证。 结果:1.PCR产物测序比对,一致性≥98.5%,鉴定为相应的细菌该结果与传统的微生物鉴定结果相符。2.在分子量3000~20000Da范围内,104个蛋白峰被捕获,90个蛋白峰有统计学意义(P<0.01)。3.细菌蛋白的孔间重复性和芯片间重复性检测好,重复检测的同一株细菌具备相似的蛋白指纹图谱。4.同种细菌不同株之间蛋白指纹图谱表达稳定,共有蛋白峰分子量变异系数≤0.5%。5.细菌蛋白指纹图谱受不同的培养时间影响不大。6.本研究择优选出质荷比(M/Z)为10061.7的蛋白峰建立甲型副伤寒沙门氏菌的分类树模型,甲型副伤寒沙门氏菌诊断的灵敏度和特异度通过验证为100%。 结论:使用AU蛋白芯片,采用SELDI-TOF-MS技术,可建立甲型副伤寒沙门氏菌的分类树诊断模型,可用于快速鉴定甲型副伤寒沙门氏菌。