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研究背景:自体移植是当今最为看好的移植治疗模式。自体胚胎干细胞(ESCs)的自我增殖和多向分化潜能使其成为最有潜力的自体移植供体源。但是,自体ESCs的创建目前还存在明显的“低效率”问题,原因主要是供体细胞核重新编序不完全、重构卵细胞组分的种系特异性丢失、或缺少父源性或母源性基因印记的影响。如此,我们提出了《亲缘性基因印记校正的雌核发育/雄核发育技术创建人自体ESCs》的全面解决方案。该方案选用自体原核作为供体细胞核源,试图解决成体细胞核基因重新编程问题;该方案通过构建雌核发育/雄核发育自体重构胚,试图解决重构胚细胞组分缺失问题;该方案还通过对雌核发育/雄核发育自体重构胚进行基因印记方面的校正处理,试图解决基因印记缺失的问题。本研究就该方案的实施能否使用辅助生殖临床废弃的未成熟卵作为(ESCs研究用)卵源、如何活体判别人类原核的亲缘性(构建雌核发育/雄核发育方式原核期胚胎)以及相关的原核移植技术进行了系列的前期基础研究和探索。 一、卵丘冠颗粒细胞剥除的人未成熟卵体外成熟培养和发育潜能的研究 目的:1、了解卵丘冠颗粒细胞剥除的人未成熟卵(ccdlMOs)体外成熟培养(IVM)和相应受精卵植入前发育潜能。2、评估同步和个体化AutoMFF-IVM(自体成熟卵泡液辅助的IVM)培养系统和AutoMFF&CCs-coIVM(自体成熟卵泡液和自体卵丘冠颗粒细胞共同辅助的IVM)培养系统分别用于M-1期(第一次减数分裂中期)和GV期(第一次减数分裂前期)ccdIMOs的IVM,相应的IVM增进效果。 方法:1、2004年11月-2005年7月间从151对[156个卵巢刺激周期实施卵浆内单精子注射(ICSI)治疗的]不孕夫妇获赠388个ccdIMOs。其中GV期卵196个,M-Ⅰ期卵192个。2、IVM标准方案使用MediCult IVM系统(Cat#:82214010,MediCult公司,丹麦),微滴培养12-48小时(37C,5%CO2,饱和湿度)并作适当改良,作为IVM