水稻广亲和S<,5>候选基因片段的反义转化和籼粳不育现象基因差异表达的初步研究

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:triyve
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该研究围绕该候选基因和籼粳不育完成了以下工作:1.对候选基因进行了表达分析,RT-PCR结果显示候选基因在籼粳品种和广亲和品种的花器官中均有表达;2.将对应候选基因3’端的shotgun亚克隆4A9反方向接入35S启动子和nos终止子之间,并构建了以pCAMBIA1301为基础的反义(antisense)转化载体;3.通过农杆菌介导法将反义构建体转化粳稻品种牡丹江8号,共获得T0代转基因单株153株,报告基因PCR平均阳性率为93﹪;以T0代转基因植株与籼稻珍汕97杂交或T1代株系的混合花粉授予珍汕97,共得到测交F,<,1>代杂交组合54个,育性考查发现同一株系内转基因单株的平均结实率相对于未转基因单株没有显著提高;RT-PCR检测到T0代转基因植株中反义片段的表达.4.抽提明恢63花药/柱头cDNA文库质粒6144个,制成高密度cDNA点阵膜;分别用南京11/秋光(籼粳交)F<,1>代和南京11/02428(籼/广亲和)F<,1>代花药柱头混合RNA反转录成的cDNA第一链作探针与膜杂交,获得差异表达克隆19个,差异表达倍数在1.7-2.5之间,同源性检索发现差异克隆的功能涉及多个生理途径.
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