A型塞内卡病毒（Senecavirus A,SVA）属于小核糖核酸病毒科Senecavirus病毒属,是一种无囊膜的单股、正链RNA病毒。SVA基因组全长约为7.2 kb,包含5’非编码区、3’非编码区和一个开放阅读框。SVA衣壳蛋白主要由四种结构蛋白VP1、VP2、VP3和VP4组成,而非结构蛋白包括2A、2B、2C、3A、3B、3C、3D。猪是SVA的自然宿主,猪只感染SVA 3至5天之后会出现鼻镜、口腔上皮、舌和蹄冠等部位的皮肤和黏膜水疱性病变等临床症状。自2015年被证实在我国传播以来,SVA已经给我国养猪业造成了巨大的经济损失。由于SVA感染临床症状与包括口蹄疫、水疱性口炎、水疱性皮炎和猪水疱病在内的水疱性疾病较为相似,且目前尚无商品化疫苗可用于SVA感染的预防和控制,因此对SVA进行临床病理学特征研究、流行病学调查、基因特征分析和检测方法建立的系统性研究对于SVA的防控具有重要意义。本研究将重庆某猪场分离的一株SVA进行了基因组测序,将其命名为SVA/CH-CQ/2019,并参考GenBank中11株已发表的SVA VP1序列对SVA/CH-CQ/2019 VP1基因进行核苷酸序列比对分析、系统进化分析和蛋白质分析。使用重组质粒pET-32a（+）-SVA-VP1转化E.coli BL21（DE3）,通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG）诱导表达重组VP1蛋白。本研究利用BHK-21细胞对SVA分离毒株进行增殖,浓缩病毒液与弗氏完全佐剂研磨乳化后免疫家兔制备了多克隆抗体。为建立SVA抗体检测ELISA方法,本研究以重组蛋白作为包被抗原,以制备的多克隆抗体作为阳性血清,建立基于SVA VP1的间接ELISA检测方法,优化ELSIA反应条件,进行了特异性、敏感性、重复性和临床样品检测试验,并将ELISA检测结果与PCR检测结果进行比较。序列分析表明SVA/CH-CQ/2019 VP1核苷酸序列与GenBank中11株已发表的SVA VP1序列同源性在91.8%～98.8%,其中与国内SVA/GXHZH-91324/2018分离株同源性达98.8%,二者处于进化树同一分支,进化关系最近;与原始分离株SVA/US/SVV-001-P3/2002同源性为91.8%,进化关系最远。VP1为稳定的结构蛋白,含有4个疏水簇,具有一定的疏水性,不存在跨膜区结构。重组质粒pET-32a（+）-SVA-VP1经双酶切鉴定正确。SDS-PAGE及Western Blot实验结果显示,IPTG成功诱导表达SVA VP1蛋白,且VP1蛋白主要以包涵体形式存在,经溶解复性后重组蛋白具有良好的免疫原性。琼脂扩散实验显示,SVA病毒凝缩液成功诱导家兔产生免疫应答。重组SVA VP1蛋白具有良好免疫原性,可以与多克隆抗体特异性结合。本研究基于SVA VP1建立了间接ELSIA检测方法,通过对反应条件进行优化确定最佳抗原包被浓度为0.4μg/mL,最佳封闭液为2%BSA,最佳血清稀释比例为1:2 000,最佳血清孵育时间为1.5 h,酶标IgG最佳稀释比例为1:10 000,最佳二抗孵育时间为30 min,最佳显色时间为15 min。批内重复试验变异系数在1.66%～3.30%,批间重复试验变异系数在1.82%～5.59%,重复性较好;与常见的猪病原体猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis of swine,TGEV）、猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）的阳性血清无交叉反应,特异性良好;对SVA阳性血清在稀释倍数为6 400倍时仍能检出,具有较好敏感性。本研究通过原核表达系统获得了具有良好免疫原性的SVA VP1蛋白,将其作为包被抗原,以自制的多克隆抗体作为阳性血清,成功建立了特异性、敏感性、重复性良好的SVA抗体间接ELISA检测方法。本研究对我国SVA的防治具有重要应用价值,为SVA中国流行毒株ELISA检测试剂盒的研发打下了基础,为SVA VP1蛋白的深入研究及亚单位疫苗的研制提供了理论基础。