银屑病患者DMSCs诱导人永生化角质形成细胞株的异常增殖

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目的:利用Transwell小室技术共同培养人真皮间充质干细胞(Human dermis mesenchymal stem cells,DMSCs)与Ha-cat细胞(人永生化角质形成细胞株);探明人DMSCs对Ha-cat细胞增殖的作用。方法:1、机械-酶顺序分离法分离银屑病患者和正常人的真皮与表皮,培养、纯化DMSCs;2、采用FCM检测Ha-cat细胞表面标记物;3、多向分化法诱导人DMSCs细胞分化,鉴定细胞的生物学特性;4、采用RTCA(实时动态细胞分析系统)检测Ha-cat细胞的增殖曲线;5、检测DMSCs诱导后的Ha-cat细胞的活细胞数量;6、用FCM检测Ha-cat细胞的增殖周期。结果:1、银屑病患者组与正常人组DMSCs细胞在形态与培养方法上无显著的差异;2、FCM检测人DMSCs表面标记物:CD29、CD44、CD73、CD90、CD105及CD105均呈高表达,而CD34、CD45及HLA-DR表达阴性,表明DMSCs有较高的纯度;3、成功使用化学试剂诱导DMSCs定向分化,使之分化为脂肪等多种组织细胞;4、x CELLigence检测结果表明:银屑病患者组较正常人对照组DMSCs细胞促进Ha-cat细胞的增殖;(患者组Ha-cat细胞CIMax值为5.55,对照组Ha-cat细胞CIMax值为5.40)5、细胞计数仪检测:银屑病患者组Ha-cat活细胞数较正常对照组有所增加;6、FCM检测细胞的增殖周期:银屑病组Ha-cat细胞进入S期的细胞比例增加。(p<0.05)。结论:1、成功模拟生物状态下人DMSCs与Ha-cat细胞(人永生化角质形成细胞株)的相互作用;2、银屑病表皮的异常增厚与人DMSCs相关。
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