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目的 脊髓损伤后神经功能的恢复是目前的研究热点,神经干细胞(neural stem cells, NSCs)移植可有助于脊髓功能的恢复,但目前的研究多集中在纹状体和皮层的神经干细胞上,对脊髓源性神经干细胞的研究为数不多。该实验对胚胎脊髓源性神经干细胞的培养、移植及对脊髓功能恢复的作用做了研究。 材料和方法 1 实验动物及其分组:选择中国医科大学实验动物部SD大鼠160只,体重200-250克,成年雌性。许可证号:SCXK(辽)2003-0009,大鼠随机分成4个组,40只为移植对象,40只为损伤对照组,40只为假手术组,40只为空白对照组。 2 脊髓损伤动物模型的制备:120只大鼠用2%戊巴比妥钠腹腔注射全麻后置于动物固定架上,备皮,消毒,于T10-12水平行椎板切除术。做15-20mm的皮肤切口,向两侧分离背肌暴露下胸段T8-13棘突,咬除T10和T11间的椎板,暴露硬膜,用手术刀片于T11脊柱水平横切此段脊髓,逐层缝合。动物细心护理防止受伤。假手术组不损伤脊髓,只行椎板切除,空白对照组不做任何处理。 3 神经干细胞的分离培养:在前期实验中,30只大鼠雌雄合笼后,检查阴栓,记为E0d,至E10.5d,将动物麻醉后,常规碘酒、酒精消毒皮肤,打开腹腔,暴露两侧子宫,用眼科镊钳住子宫头端,顺子宫分离至子宫角处剪下,放入培养皿中,依次去除子宫壁及胎膜,在解剖显微镜下仔细分离胎鼠脊髓