桉叶精油提取、纳米乳化及其抑菌活性研究

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桉叶精油是桉叶油腺细胞分泌的含萜类、脂肪族、芳香族化合物等混合物的统称,具有抑菌、抗氧化、杀虫、消炎等生理活性,已被广泛应用于食品、化工、医药等行业。目前,国内外对桉叶精油的研究主要集中于其抗菌、抗氧化等活性,而在桉叶精油提取工艺优化、精油得率与抑菌效果的差异性、桉叶精油缓释技术及其相应抑菌效果的变化规律,鲜见报道。本文以大叶桉叶为研究对象,以桉叶精油得率和抑菌活性为评价指标,确立了桉叶精油最佳提取工艺条件:经GC-MS检测与分析.发现不同提取方法所得桉叶精油组成及含量的差异性;通过对不同粒径桉叶精油乳化体系的构建,探明了桉叶精油乳液粒径大小与其抑菌活性强弱的关系,并使桉叶精油兼顾抑菌活性、储藏稳定性与缓释控制的可行性得到了初步证实。本研究为拓宽桉叶的综合利用开辟了新的空间,可为桉叶精油制备食品天然保鲜剂提供试验依据。具体研究结果如下:1.首先,以桉叶油得率为指标,对桉叶精油提取工艺进行了优化。结果表明,当料液比1:4、超声时间25 min、超声功率200 w、蒸馏时间5h时,其得率最高为1.51%。其次,以各正交试验组合所得精油为试材,探究了桉叶精油得率与其抑菌活性的差异性。对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌而言,当料液比1:6、超声时间30 min、超声功率180 w、蒸馏时间5h时,所得精油抑菌活性最强,抑菌圈直径分别为(11.92±0.20)mm (n=3)和(10.25±0.35) mm (n=3),最低杀菌浓度分别为9 μL/mL和6μL/mL,但对应的桉叶油得率仅为1.28%。对黑曲霉而言,当料液比1:7、超声时间30min、超声功率200w、蒸馏时间7h时,所得精油抑菌活性最强,抑菌圈直径为(12.25+0.29)mm(n=3),最低杀菌浓度为14μL/mL,而对应的桉叶油得率为1.38%。2.分别以对青霉与黑曲霉的抑菌圈直径为指标,对桉叶精油的提取工艺进行了优化。结果表明,当料液比1:6、超声时间45 min、超声功率400 w、蒸馏时间8h时,可获得对青霉具有强抑菌效果的桉叶精油(EOELP);当料液比1:8、超声时间45min、超声功率450 w、蒸馏时间7 h时,则能获得对黑曲霉具有最佳抑菌作用的桉叶精油(EOELA)。为了探究EOELP与EOELA抑菌活性差异的原因,对其进行了GC-MS检测与分析,发现两种提取工艺所得桉叶精油的组分和含量均存在较大差异。在鉴定出的共68种化合物中,共有化合物只有37种;EOELP中含氧单萜与倍半萜的含量分别比EOELA高78.52%和43.03%,而EOELA中的单萜和含氧倍半萜含量分别比EOELP高15.63%和123.69%;另外,两种精油的主要成分α-蒎烯的含量亦有明显差异,差值为3.78%。3.为获得即具较强抑菌活性与良好稳定性,又能实现缓释控制的桉叶精油乳液,在构建不同粒径桉叶精油乳化体系的基础上,研究了桉叶精油纳米乳液的稳定性,以及乳液的粒径大小与其抑菌活性强弱的关系。结果表明,当复合表面活性剂中Cremophor EL30与无水乙醇比例为4:1(m/m)、添加量为12.77%(m/m),桉叶精油添加量为12.05%(m/m)时,所得微乳的平均粒径为(39.29±1.21)nm,多分散系数(PDI值)为0.155+0.006,此乳液存放90 d后仍然稳定;而其对黑曲霉和青霉的抑菌圈直径与最低杀菌浓度均显示,部分粒径级别桉叶精油纳米乳与常乳并无显著性差异p<0.05),但不同粒径级别纳米乳的抑菌效果并未呈现出明显的规律性。
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