论文部分内容阅读
营养期杀虫蛋白Vip3(vegetative insecticidal protein3，VIP3)是苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis，简称Bt)在营养生长期分泌一种对鳞翅目昆虫具有广谱的杀虫活性的蛋白质。研究表明：Vip3与广泛使用的Bt杀虫晶体蛋白(insecticidal crystal proteins，ICPs)在进化上没有同源性，并且两者作用机制不同，不存在交叉抗性。因而，分离克隆高毒力的营养期杀虫蛋白vip3基因对于构建高效广谱的基因工程微生物和培育转基因抗虫植物具有重要的意义。本文比较系统地介绍了Bt菌株筛选过程，利用分子鉴定的方法，通过设计不同PCR引物，得到了不同的vip3基因，证实了Vip3蛋白的多样性，同时，从整体上分析了不同Vip3同源基因所占比例，为今后发掘Bt中新型vip3杀虫同源基因提供参考。结果如下：
(1)利用保守片段PCR的方法筛选了583株Bt菌株中的vip3基因，发现303株PCR扩增反应呈阳性，说明至少占筛选菌株38.5％的Bt菌株具有vip3基因。
(2)通过非保守片段PCR测试，推测其中含有Vip3Aa(AAC37036)基因的菌株有281株，占筛选菌株的35.7％，占Vip3菌株的92.74％。这说明在自然界野生菌株中，绝大多数菌株中是Vip3Aa基因。
(3)其他类型的vip3基因共有22株，占筛选菌株的2.80％。占vip3基因的7.26％。其中Vip3Ba1(AAV70653)有6株，占vip3基因的1.98％；Vip3Af(ISP3A，CAI43275)有5株，占Vip3基因的1.65％；Vip3Ah1(Vip3S DQ832323)有8株，占整个Vip3基因的2.64％。